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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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水蛭素（hirudin）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/17 11:37:09 阅读次数：39

水蛭素（hirudin）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

水蛭素（hirudin）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物凝血酶受到水蛭素的结合抑制，降低三肽化合物分子的水解，根据其释放产物有色对硝基苯胺所产生的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中水蛭素活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种重组蛋白、药物成分、血浆中残留，以及水蛭样品中水蛭素的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

水蛭素（hirudin）是水蛭（leech）唾液腺中自然存在的多肽，是多种亚型的混合物。水蛭素由65个氨基酸组成，分子量为6980dalton构成致密的N-末端结构域（含有3个二硫键）和C末端结构域。水蛭素具有抗凝血作用，类似于人体血液循环中凝血酶的抑制剂抗凝血酶III，结合并特异性抑制凝血酶的活性，防止和溶解血凝块的形成。通过重组蛋白技术，生物合成水蛭素，作为药物，用于抗凝血和抗血栓治疗。较之肝素，不会影响体内其它血清蛋白的作用。基于底物凝血酶，受到水蛭素的结合抑制，有限水解人工合成的三肽化合物底物（对甲苯磺酰甘氨酰脯氨酰精氨酰对硝基苯胺），根据其释放产物有色对硝基苯胺，在分光光度仪（405nm 波长）下，测定吸光峰值的变化，来定量测定水蛭素的活性。其反应系统为：

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升

反应液（Reagent B）微升

底物液（Reagent C）微升

显色液（Reagent D）微升

阴性液（Reagent E）微升

标准液（Reagent F）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里；显色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月

用户自备

抗凝管：用于血液采集

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

培养箱：用于反应孵育

酶标板或比色皿：用于样品比色测定的容器

酶标仪或分光光度仪：用于样品比色分析

实验步骤

一、 样品制备

选择一：血浆样品

1．准备好ACD抗凝管

2．抽取1毫升血液，置于抗凝管里

3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）

5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

选择二：蛋白样品

1．准备好纯化的重组蛋白或药物（50微克/毫升）

2．移取10微升到新的1.5毫升离心管

3．加入xx微升缓冲液（Reagent A），混匀

4．即刻置于冰槽里备用

选择三：水蛭虫体样品

1．准备好水蛭虫体唾液腺裂解悬液

2．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

3．加入适量的缓冲液（Reagent A）调整样品蛋白浓度为50微克/20微升

4．即刻置于冰槽里备用

二、 测定准备

1．准备好上述制备的待测样品

2．设定好酶标仪（温度为25℃）：波长405nm，并置零

3． 缓冲液（Reagent A）室温下均衡温度

4．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

5．分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管

6．移取xx微升标准液（Reagent F）到1号管，混匀

7．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent F）到2号管，混匀

8．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀

9．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀

10．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent A）	标准液（Reagent F）	标准水蛭素浓度
1	xx微升	xx微升	xx微克/毫升
2	xx微升	xx微升1号管	xx微克/毫升
3	xx微升	xx微升2号管	xx微克/毫升
4	xx微升	xx微升3号管	xx微克/毫升
5	xx微升	——	0

三、 活性测定

1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照、标准样品和待测样品

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent A）到所有孔中

3．分别加入xx微升反应液（Reagent B）

4．分别加入xx微升底物液（Reagent C）

5．加入xx微升阴性液（Reagent E）到背景对照孔

6．加入xx微升上述配制的标准液（Reagent F）到标准样品孔

7．加入20微升上述制备的待测样品（50微克蛋白总量）到待测样品孔中

8．轻轻摇动96孔酶标板

9． 25℃温度下孵育1分钟

10．即刻分别加入xx微升显色液（Reagent D）

11．轻轻摇动96孔酶标板（注意：避免气泡）

12．在37℃温度下孵育60分钟（注意：可见反应孔里呈现肉眼可见的黄色）

13．即刻放进酶标仪检测

14．获得吸光读数

15．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数（OD）；横座标（X轴）为标准水蛭素浓度（微克/毫升）

16．含量计算：

17. 活性计算：

注意事项

1．本产品为21次操作，包括背景对照

2．本产品检测范围20纳克/毫升至4微克/毫升

3．操作时，须戴手套

4．系统操作过程中，背景测定只需1次

5．样品避免反复冻融

6．比色测定后，比色皿须清洗彻底

7．样本测定值越低，表明水蛭素含量或活性越高

8．建议待测样本蛋白浓度为50微克/20微升；血浆容量为10至20微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

9．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

10．本公司提供系列细胞蛋白酶学检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号名称规格

G&VS10147.2 水蛭素（hirudin）活性比色法定量检测试剂盒 20次

G&VS10147.2A 缓冲液（Reagent A） 50毫升

G&VS10147.2B 反应液（Reagent B） 5毫升

G&VS10147.2C 底物液（Reagent C） 5毫升

G&VS10147.2D 显色液（Reagent D） 5毫升

G&VS10147.2E 阴性液（Reagent E） 5毫升

G&VS10147.2F 标准液（Reagent F） 1毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10146.1	肝素（heperin）纤维蛋白检测法（Fibrometer）分析试剂盒	50次
G&VS10146.2	肝素（heperin）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10146.3	肝素（heperin）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10147.1	水蛭素（hirudin）纤维蛋白检测法（Fibrometer）分析试剂盒	50次
G&VS10147.2	水蛭素（hirudin）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10147.3	水蛭素（hirudin）活性荧光定量检测试剂盒	20次