当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2026/8/17 11:43:42 阅读次数：47
纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒产品说明书
主要用途
纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂是一种旨在通过蛋白质羰基与2,4-二硝基酚联胺反应，产生蛋白质腙复合物后峰值的变化，即采用比色法来测定样品中羰基含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织纯化线粒体裂解萃取液样品（动物、人体）蛋白质羰基的含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
蛋白质氧化是由于活性氧直接诱导或氧化应激产物间接诱导产生蛋白质分子的共价修饰（covalent modification），其中包括体外氧化剂，以及衰老、疾病所致。氧化还原循环中的阳离子，例如亚铁离子或铜离子，可以与蛋白分子阳离子结合位点结合，一旦受到过氧化氢或氧分子的攻击，致使蛋白分子上脯氨酸（proline）、精氨酸（arginine）、赖氨酸（lysine）、苏氨酸（threonine）、组氨酸（histidine）转化为羰基衍生物（carbonyl derivatives）。羰基是由碳原子和氧原子双键构成的功能性基团。蛋白质羰基衍生物化学性能稳定，其羰基化含量成为最普遍的氧化应激活性氧的指标，更是蛋白质氧化的标志。基于蛋白质羰基与2,4-二硝基酚联胺（2,4-dinitrophenylhydrazine；DNPH）反应，形成希夫碱，产生蛋白质腙复合物（protein- hydrazone），在分光光度仪显示吸光峰值的变化（370nm波长），来定量测定羰基含量。其反应系统为：
Protein carbonyls + DNPH → protein- hydrazone
产品内容
清理液（Reagent A） XX毫升
裂解液（Reagent B） XX毫升
溶解液（Reagent C） XX毫升
去干扰液（Reagent D） XX毫升
反应液（Reagent E） XX瓶
阴性液（Reagent F） XX毫升
沉淀液（Reagent G） XX毫升
净化液（Reagent H） XX毫升
处理液（Reagent I） XX毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存去干扰液（Reagent D）和反应液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent E）避免光照；阴性液（Reagent F）、沉淀液（Reagent G）和处理液（Reagent I）具有腐蚀性，注意操作安全；净化液（Reagent H）具有挥发性，注意密闭瓶盖；有效保证6月
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
2毫升离心管：用于样品反应的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞和组织
（微型）台式离心机：用于萃取反应产物
涡旋震荡仪：用于混匀反应
96孔板：用于比色的容器
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
1、 细胞线粒体纯化操作
1． 准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 107），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
10． 小心抽去上清液
11． 加入XX毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入XX毫升预冷的裂解液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群
16． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
17． 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20至40下）
18． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
20． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
21． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g
22． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒
23． 加入XX微升的溶解液（Reagent C），混匀颗粒群
24． 加入XX微升去干扰液（Reagent D），混匀
25． 室温下孵育15分钟
26． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为6000g
27． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
28． 移取XX微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
29． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作（注意：建议在1月之内完成检测）
2、 组织线粒体纯化操作
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入XX毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入XX毫升预冷的裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）
10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
13． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g
14． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物
15． 加入XX微升的溶解液（Reagent C），混匀颗粒群
16． 加入XX微升去干扰液（Reagent D），混匀
17． 室温下孵育15分钟
18． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为6000g
19． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
20． 移取XX微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
21． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作（注意：建议在1月之内完成检测）
二、 样品检测
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent E）取出，加入XX毫升阴性液（Reagent F），混匀，标记为反应工作液，置入冰槽里备用，避免光照。然后进行下列操作。
1． 准备好待测样品（例如纯化线粒体裂解萃取液样品等），置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪：波长370nm，并置零
3． 准备2个2毫升离心管，标记为背景管和样品管
4． 分别移取200微升待测样品到背景管和样品管
5． 加入XX微升反应工作液到样品管
6． 加入XX微升阴性液（Reagent F）到背景管
7． 分别涡旋震荡15秒
8． 室温下孵育60分钟，每隔15分钟涡旋震荡15秒，避免光照
9． 分别加入XX毫升沉淀液（Reagent G）
10． 分别涡旋震荡15秒
11． 置于冰槽里孵育5分钟
12． 放进微型台式离心机离心15分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
13． 分别小心抽去上清液
14． 分别加入XX毫升净化液（Reagent H）
15． 分别涡旋震荡15秒
16． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
17． 分别小心抽去上清液
18． 分别加入XX微升处理液（Reagent I）
19． 分别涡旋震荡15秒
20． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
21． 分别移取250微升上清液到96孔板里的测试孔
22． 即刻放进酶标仪检测：获得背景读数和样品读数
23． 实际吸光读数：样品管读数－背景管读数
24． 计算样品含量：
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 阴性液（Reagent F）、沉淀液（Reagent G）和处理液（Reagent I）具有腐蚀性，注意操作安全
4． 净化液（Reagent H）具有挥发性，注意密闭瓶盖
5． 每次检测，需进行样品背景测定
6． 反应工作液配制后，可以在4℃保存，但需在1周内用完；避免-20℃保存
7． 如果氧化活性过低，可以增加反应时间至2小时
8． 建议待测样本蛋白浓度为1至10毫克/毫升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
9． 本公司提供系列氧化检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10151.1.5 纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 20次
G&VS10151.1.5A 清理液（Reagent A） 500毫升
G&VS10151.1.5B 裂解液（Reagent B） 100毫升
G&VS10151.1.5C 溶解液（Reagent C） 50毫升
G&VS10151.1.5D 去干扰液（Reagent D） 5毫升
G&VS10151.1.5E 反应液（Reagent E） 5瓶
G&VS10151.1.5F 阴性液（Reagent F） 100毫升
G&VS10151.1.5G 沉淀液（Reagent G） 100毫升
G&VS10151.1.5H 净化液（Reagent H） 500毫升
G&VS10151.1.5I 处理液（Reagent I） 100毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10151.1.1 | 细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.2 | 组织内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.3 | 血液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.4 | 体液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.5 | 纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.6 | 植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.2 | 冰冻切片蛋白氧化（羰基化；carbonyl）免疫染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10372.1.1 | 细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.2 | 组织内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.3 | 血液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.4 | 体液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.5 | 纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.6 | 植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-7
