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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞内钙离子水平动态变化荧光检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/20 11:24:20 阅读次数：26

细胞内钙离子水平动态变化荧光检测试剂盒产品说明书

主要用途

细胞内钙离子水平动态变化荧光检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Indo-1-AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下测量不同散发波长下相对荧光峰值的比值，来测定细胞内钙离子水平动态变化的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）细胞内钙离子动态水平的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中细胞内钙离子水平在调节钙离子通道，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。细胞内钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要线粒体、细胞浆分离。Indo-1 AM（acetoxy-methyl ester），一种具有细胞膜通透性，与钙离子结合产生荧光的染料，稳定性强，持续时间长达一小时，定位明确，通过其不同散发波长405nm/485nm产生的荧光信号比（激发波长350nm）来精确测定细胞内钙离子水平的动态变化。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

染色液（Reagent B）微升

介导液（Reagent C）微升

饱和液（Reagent D）毫升

阴性液（Reagent E）毫升

裂解液（Reagent F）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）和介导液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制和样品操作的容器

细胞培养箱：用于染色孵育

96孔培养板：用于样品操作的容器

荧光酶标仪：用于荧光分析

（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光染色观察

细胞流式仪：用于荧光分析

实验步骤

一、 测定准备

1．设定好荧光酶标仪：激发波长350nm，散发波长405nm和485nm；增益倍数100至200

2．测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）室温下融化，然后分别移出xx微升介导液（Reagent C）和xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

二、荧光酶标仪检测

1．准备1个96孔细胞培养板，标记为：细胞样品孔、空白对照孔（不含细胞）、最大对照孔（含细胞）

2．小心抽去细胞样品孔和最大对照孔的培养液

3．加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里

4．加入xx微升饱和液（Reagent D）到最大对照孔里

5．加入xx微升阴性液（Reagent E）到空白对照孔里

6．分别加入10微升染色工作液到所有孔里

7．轻轻摇动酶标板，混匀

8．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照

9．小心抽去细胞样品孔里的上清液

10．小心加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞样品孔里

11．重复实验步骤9和10一次

12．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟

13．加入xx微升裂解液（Reagent F）到最大对照孔里

14．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟

15．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）包括样品RFU405nm、样品RFU485nm、空白对照孔RFU405nm、空白对照孔RFU485nm、最大对照孔RFU405nm、最大对照孔RFU485nm

16．计算样品细胞浆钙离子浓度

三、（共聚焦）荧光显微镜检测

1．准备1个待测的细胞爬片

2．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖样品表面

3．小心移去样品上的清理液（Reagent A）

4．移取xx微升清理液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管

5．加入xx微升染色工作液，混匀

6．小心加上上述含有染色工作液的溶液到样品上，覆盖样品表面

7．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照

8．小心移去样品上的染色工作液

9．小心加上xx微升新鲜的清理液（Reagent A）

10．小心移去清理液（Reagent A）

11．小心加上xx微升新鲜的清理液（Reagent A）

12．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟

13．小心移去清理液（Reagent A）

14．盖上盖玻片

15．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长420nm（细胞内钙离子呈现蓝色荧光）

四、倒置荧光显微镜动态检测

1．准备1个48孔培养板的细胞样品

2．小心抽去培养液

3．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖细胞表面

4．小心移去样品上的清理液（Reagent A）

5．加入xx微升清理液（Reagent A）

6．加入30微升染色工作液，轻轻摇动培养板混匀

7．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照

8．小心抽去染色工作液

9．小心加入xx微升新鲜的清理液（Reagent A）

10．小心抽去清理液（Reagent A）

11．小心加入500微升用户自备的培养液或药物处理溶液

12．放进37℃细胞培养箱里孵育实验设定的时间点

13．在倒置荧光显微镜下进行实时观察：激发波长350nm，散发波长405至420nm（细胞内钙离子呈现蓝色荧光）

五、细胞流式仪检测

1．将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 10⁶细胞）移入到1.5毫升离心管

2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

3．小心抽去上清液

4．加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

5．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

6．小心抽去上清液

7．加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

8．加入30微升染色工作液，混匀

9．放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟，避免光照

10．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

11．小心抽去上清液

12．小心加入xx微升新鲜的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

13．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

14．小心抽去上清液

15．小心加入xx微升新鲜的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

16．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟

17．（选择步骤）移出5微升到载玻片上，放上盖玻片

18．（选择步骤）即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长405至420nm（细胞内钙离子呈现蓝色荧光）

19．即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察50000个细胞以上

激发波长	350nm	350nm
荧光颜色	蓝色	绿色
散发波长	420nm	510nm
流式仪通道	FL1	FL2
荧光增强	钙离子阳性	钙离子阴性

注意事项

1．本产品为20次（显微镜）或60次（酶标板）操作

2．操作时，须戴手套

3．可以使用荧光分光光度仪检测

4．如果细胞内酯酶缺失，则建议使用微注射（microinjection）技术

5．避免使用EDTA等处理样品

6．孵育反应完成后即刻进行荧光测定

7．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

8．检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围

9．本公司提供系列钙生化检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10154 细胞内钙离子水平动态变化荧光检测试剂盒 20次

G&VS10154A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10154B 染色液（Reagent B）微升

G&VS10154C 介导液（Reagent C）微升

G&VS10154D 饱和液（Reagent D）毫升

G&VS10154E 阴性液（Reagent E）毫升

G&VS10154E 裂解液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS50097.1	细胞钙离子浓度比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50097.2	组织钙离子浓度比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50097.3	体液钙离子浓度比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50097.4	食物钙离子浓度比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50097.5	环境钙离子浓度比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS70036	血清钙比色法定量检测试剂盒	50次
G&VS10152	胞浆内钙离子浓度荧光检测试剂盒	20次
G&VS10153	线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒	20次
G&VS10154	细胞内钙离子水平动态变化荧光检测试剂盒	20次
G&VS10267	内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒	20次
G&VS10157.1	细胞钙离子浓度荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10157.2	组织钙离子浓度荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10157.3	体液钙离子浓度荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10157.4	食物钙离子浓度荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10157.5	环境钙离子浓度荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS80045.1	石蜡样品冯库萨（VON KOSSA）钙染色试剂盒	50次
G&VS80045.2	冰冻样品冯库萨（VON KOSSA）钙染色试剂盒	50次
G&VS80045.3	细胞冯库萨（VON KOSSA）钙染色试剂盒	50次
G&VS80045.4	全组织冯库萨（VON KOSSA）钙染色试剂盒	10次
G&VS80046.1	石蜡样品茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒	50次
G&VS80046.2	冰冻样品茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒	50次
G&VS80046.3	细胞茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒	50次
G&VS80046.4	全组织茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒	10次