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发布时间：2026/8/20 12:15:10 阅读次数：36
细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）流式细胞分析试剂盒产品说明书
主要用途
细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）流式细胞分析试剂是一种旨在使用单克隆抗8-羟基脱氧鸟苷抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过双重参数细胞流式仪定量评价DNA损伤水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体等）的8-羟基脱氧鸟苷的定量分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡、肿瘤等的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
核酸氧化损伤（nucleotide oxidative damage），包括DNA和RNA损伤，是由于环境因子或细胞代谢影响，在逃避细胞防御机制的前提下，所产生的四种损伤之一：氧化、烷化（alkylation）、水解和碱基错配损伤等。而氧化损伤主要通过活性氧族（reactive oxygen species；ROS），包括超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）等的作用，使碱基羟基化和嘌呤环裂开，诱导鸟嘌呤（guanine；G）向胸腺嘧啶（thymine；T）的颠换（transversion），造成体细胞基因突变，影响细胞周期、基因转录、细胞凋亡等，最终导致各种疾病的发生，例如糖尿病、高血压、中风、癌症、衰老等。其中核酸损伤产物8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine；8-OHdG）作为DNA损伤的分子标志；8-羟基鸟苷（8-hydroxyguanosine）作为RNA损伤的分子标志。8-羟基脱氧鸟苷是最常见的DNA损伤产物，也是氧化应急的生物标志。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
酶解液A（Reagent C） 毫升
酶解液B（Reagent D） 毫升
变性液（Reagent E） 毫升
中和液（Reagent F） 毫升
封阻液A（Reagent G） 毫升
封阻液B（Reagent H） 毫升
抗体液（Reagent I） 微升
荧光液（Reagent J） 微升
复染液（Reagent K） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，严禁反复冻融；荧光液（Reagent J）和复染液（Reagent K）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备好待测细胞（2 X 105细胞）
2． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
3． 小心抽去细胞培养液
4． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
5． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
6． 小心抽去清理液（Reagent A）
7． 加入xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent B），混匀
8． 置于－20℃冰箱里孵育20分钟
9． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
10． 小心抽去固着液（Reagent B）
11． 空气中晾干
12． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
13． 室温下孵育2分钟
14． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
15． 小心抽去清理液（Reagent A）
16． 加入xx微升酶解液A（Reagent C），混匀
17． 置于37℃培养箱里孵育60分钟
18． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
19． 小心抽去酶解液A（Reagent C）
20． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
21． 室温下孵育2分钟
22． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
23． 小心抽去清理液（Reagent A）
24． 重复实验步骤20至23一次
25． 加入xx微升酶解液B（Reagent D），混匀
26． 置于37℃培养箱里孵育10分钟
27． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
28． 小心抽去酶解液B（Reagent D）
29． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
30． 室温下孵育2分钟
31． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
32． 小心抽去清理液（Reagent A），混匀
33． 重复实验步骤29至32一次
34． 加入xx微升变性液（Reagent E），混匀
35． 室温下孵育10分钟
36． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
37． 小心抽去变性液（Reagent E）
38． 加入xx微升中和液（Reagent F），混匀
39． 室温下孵育5分钟
40． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
41． 小心抽去中和液（Reagent F）
42． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
43． 室温下孵育2分钟
44． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
45． 小心抽去清理液（Reagent A）
46． 重复实验步骤42至45一次
47． 加入xx微升封阻液A（Reagent G），混匀
48． 室温下孵育30分钟
49． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
50． 小心抽去封阻液A（Reagent G）
51． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
52． 室温下孵育2分钟
53． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
54． 小心抽去清理液（Reagent A）
55． 重复实验步骤51至54一次
56． 加入xx微升封阻液B（Reagent H），混匀
57． 室温下孵育30分钟
58． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
59． 小心抽去封阻液B（Reagent H）
60． 加入xx微升抗体液（Reagent I），混匀
61． 置于37℃培养箱里孵育60分钟 （或4℃冰箱里孵育过夜）
62． 小心抽去抗体液（Reagent I）
63． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀
64． 置于37℃培养箱里孵育2分钟
65． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
66． 小心抽去清理液（Reagent A）
67． 重复实验步63至66二次
68． 加入xx微升荧光液（Reagent J），充分混匀
69． 室温下孵育45分钟，避免光照
70． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀
71． 涡旋震荡3秒
72． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
73． 小心抽去上清液
74． 重复实验步骤70至73二次
75． 加入xx微升复染液（Reagent K），用枪头充分混匀
76． 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测），避免光照
77． 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光器，观察50000个细胞以上
78． 建立地形图或散点图以及直方图分析
|
| 荧光液（Reagent J） | 复染液（Reagent K） |
| 荧光染料 | 异硫氰酸荧光素（FITC） | 碘化丙啶（Propidium iodide；PI） |
| 荧光颜色 | 绿色 | 红色 |
| 散发波长 | 530 | 575（使用phycoerythrin的信号检测） |
| 流式仪通道 | FL1 | FL2 |
| 作用 | DNA损伤 | DNA含量 |
注意事项
1． 本产品为10次操作量
2． 操作时，须戴手套
3． 孵育时，避免光照
4． 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过3天
5． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
6． 细胞检测量不得少于10000个
7． 检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
8． 告知流式仪技术员有关细胞类型
9． 本公司提供细胞流式仪分析外包服务
10． 本公司提供系列DNA损伤检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10155.2 细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷流式细胞分析试剂盒 10次
G&VS10155.2A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10155.2B 固着液（Reagent B） 毫升
G&VS10155.2C 酶解液A（Reagent C） 毫升
G&VS10155.2D 酶解液B（Reagent D） 毫升
G&VS10155.2E 变性液（Reagent E） 毫升
G&VS10155.2F 中和液（Reagent F） 毫升
G&VS10155.2G 封阻液A（Reagent G） 毫升
G&VS10155.2H 封阻液B（Reagent H） 毫升
G&VS10155.2I 抗体液（Reagent I） 毫升
G&VS10155.2J 荧光液（Reagent J） 毫升
G&VS10155.2K 复染液（Reagent K） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10155.1 | 细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10155.2 | 细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10155.3 | 核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA分析试剂盒 | 48/96次 |
| G&VS10155.4 | 冰冻切片核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）荧光染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10155.5 | 石蜡切片核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）荧光染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10155.6 | 核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）高效液相色谱（HPLC）分析试剂盒 | 20次 |
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