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发布时间：2026/8/21 13:43:33 阅读次数：28
氢离子膜通道转运功能(P 型 ATP 酶)绿色荧光检测试剂盒产品说明书
主要用途
氢离子膜通道转运功能(P型ATP酶)绿色荧光检测试剂是一种旨在使用选择性V型ATP酶抑制剂 的条件下， 通过质子荧光探针， 由于膜性囊泡产生pH梯度变化， 而进入囊泡内产生荧光淬灭， 来分析和观 察氢离子转运功能，进一步评价P型ATP酶的胃H＋/K＋ ATP酶、非胃性H＋/K＋ ATP酶和H＋ ATP酶活性的权威 而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体、真菌/ 酵母、植物等氢离子转运活性，即P型ATP酶的胃H＋/K＋ ATP酶、非胃性H＋/K＋ ATP酶和H＋ ATP酶功能的检 测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞膜上的膜整合蛋白(integral membrane protein) 参与细胞内外的物质传输、能量产生与转化等生物学过 程，构成离子或代谢分子的通道， 常见的包括氢离子、钠离子、钾离子等电解质，在能量依赖型或非依赖 型的条件下， 完成生理代谢的物质交换。膜通道转运功能检测(transport或uptakeassay) 用于分析转运蛋白 (transport protein) 和底物(substrate) 的功能、筛选通道抑制剂、进而发现药物以及抗药性机制。建立分 子构建的载体或宿主模型、分离膜性囊泡(membrane vesicle)包括正常外向膜性囊泡(Right-side out；RSOV) 或内侧外翻膜性囊泡(In-side out；IOV)，通过标记底物的转运， 来定量测定转运活性。氢离子膜通道转运 功能，即氢离子泵功能(hydrogen pump)，是ATP依赖性转运，通过ATP酶，包括V型， F型和P型ATP酶的 H＋或H＋/K＋ ATP酶等， 达到细胞内的酸化环境和平衡。通过使用pH敏感性阳离子三环胺荧光染料丫啶橙 (Acridineorange；AO)，作为氢离子探针， 在转运蛋白和ATP的存在下， 产生pH梯度， 即囊泡内酸化诱导， 而转移到囊泡内， 在膜内侧结合质子化(protonated)，使绿色荧光淬灭(激发波长 490nm，散发波长 530nm)， 以分析转运蛋白V型、 F型和P型ATP酶中H＋或H＋/K＋ ATP酶的功能， 以及其抑制剂的筛选。氢离子膜通道转 运功能(P型ATP酶) 检测通过使用V型ATP酶抑制剂巴佛洛霉素A1 (bafilomycinA1) 来评价特异性P型ATP 酶的胃H＋/K＋ ATP酶、非胃性H＋/K＋ ATP酶或H＋ ATP酶等。
产品内容
| 缓冲液(Reagent A) | 毫升 |
| 载体液(Reagent B) | 毫升 |
| 反应液(Reagent C) | 毫升 |
| 补充液(Reagent D) | 毫升 |
| 产品说明书 | 1 份 |
| 保存方式 |
|
| 保存在－20℃冰箱里， 避免光照；有效保证 6 月 |
|
用户自备
恒温水槽或培养箱：用于反应孵育
1 毫升比色皿：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪：用于荧光定量分析
实验步骤
一、 样品准备
1 ． 确定测定对象：动物/人体、真菌/酵母或植物
2 ． 分离膜性囊泡(RSOV 或 IOV)(注意：建议使用 系列分离试剂盒产品)
|
| 胃 H/K ATP 酶 | 非胃性 H/K ATP 酶 | H ATP 酶 |
| 动物/人体 | 胃肠组织或胃腺细胞的 微粒体(RSOV) | 肾组织的微粒体 (RSOV) | ―― |
| 真菌/酵母 | ―― | ―― | 微粒体(RSOV)或质膜(IOV) |
| 植物 | ―― | ―― | 微粒体(RSOV)或质膜(IOV) |
3 ． 准备好待测的分离样品，置于冰槽里备用
二、 测定准备
1 ． 开启并设定好荧光分光光度仪(温度为 22℃)：激发波长为490nm，散发波长 530nm，间隔 30 秒测读
1 次，持续 10 分钟至 30 分钟，并置零
2 ． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置于室温下冻融预热，避免光照。然后进行下列操作
三、 荧光测定
1 ． 准备 2 个 1 毫升比色皿，并标记为对照样品管、抑制剂样品管
2 ． 分别加入 xx 微升 缓冲液(Reagent A)
3 ． 加入 xx 微升 阴性液(Reagent D) 到对照样品管
4 ． 加入 xx 微升用户自备的抑制剂(注意： 使用各种浓度梯度)到抑制剂样品管
5 ． 分别加入 xx 微升待测样品(500 微克蛋白)
6 ． 在 37℃恒温水槽孵育 5 分钟
7 ． 分别加入 xx 微升 载体液(Reagent B)
8 ． (选择步骤) 放进荧光分光光度仪，测读 1 分钟
9 ． (选择步骤)取出比色皿
10．分别加入 xx 微升 反应液(Reagent C)
11．上下倾倒数次，混匀(限定在 3 秒之内)
12．即刻放进荧光分光光度仪(激发波长为 490nm，散发波长 530nm)：获得 0 分钟和设定系列时间 10 分 钟至 30 分钟的相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit；RFU) ―― RFU降低，表明氢离子转运功能活性增强
13．构建转运曲线：纵座标(Y)为相对荧光单位(RFU)，横座标(X)为时间(分钟)
14．构建抑制曲线(设定终点 30 分钟)：纵座标(Y)为相对荧光单位(RFU)，横座标(X)为抑制剂浓
度(微摩尔)
15．构建百分率抑制曲线(设定 30 分钟)：纵座标(Y)为抑制百分率(％)，横座标(X)为抑制剂浓度 (微摩尔)
16．根据上述曲线，计算 IC50 (50％抑制率所需的抑制剂浓度)
注意事项
1 ． 本产品为 20 次操作
2 ． 操作时，须戴手套
3 ． 建议用户使用本公司的膜性囊泡(RSOV 和IOV)制备试剂盒准备样品
4 ． 孵育时，避免光照
5 ． 建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析
6 ． 用户根据实验情况，可以调整终点时间： 10 分钟、 20 分钟、30 分钟
7 ． 用户可以在某个时间点，加入抑制剂，观察转运走势变化
8 ． 可以使用 P 型 ATP 酶抑制剂正钒酸盐(orthovanadate)作为抑制剂对照
9 ． 本公司提供GENMED氢离子膜通道转运功能(P型ATP酶) 蓝色荧光检测试剂盒－G&VS G&VS10159.2.2， 即使用 9-氨基-6-2- 甲氧基吖啶(9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine；ACMA)荧光探针
10．本公司提供系列离子膜通道转运功能(transport/uptake) 分析试剂产品
质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
| 编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10159. 1.2 | 氢离子膜通道转运功能(P 型 ATP 酶)绿色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159. 1.2A | 缓冲液(Reagent A) | 100 毫升 |
| G&VS10159. 1.2B | 载体液(Reagent B) | 10 毫升 |
| G&VS10159. 1.2C | 反应液(Reagent C) | 10 毫升 |
| G&VS10159. 1.2C | 补充液(Reagent C) | 10 毫升 |
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10159. 1. 1 | 氢离子膜通道转运功能(F 型 ATP 酶)绿色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159. 1.2 | 氢离子膜通道转运功能(P 型 ATP 酶)绿色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159. 1.3 | 氢离子膜通道转运功能(V 型 ATP 酶)绿色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159.2. 1 | 氢离子膜通道转运功能(F 型 ATP 酶)蓝色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159.2.2 | 氢离子膜通道转运功能(P 型 ATP 酶)蓝色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10159.2.3 | 氢离子膜通道转运功能(V 型 ATP 酶)蓝色荧光检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10160 | 钠离子膜通道转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10161 | 钾离子膜通道转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10162 | 钙离子膜通道转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10163 | 镁离子膜通道转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10164 | 铜离子膜通道转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10165 | 5-羟色胺(Serotonin)转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10166 | 去甲肾上腺素(Norepinephrine)转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10167 | 多巴胺(Dopamine)转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10168 | 脂肪酸转运功能检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10169. 1 | 动物细胞膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10169.2 | 动物组织膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10169.3 | 真菌/酵母膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10169.4 | 细菌膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10169.5 | 红细胞膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS16021 | 植物膜性囊泡(RSOV 和 IOV)制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10170 | IOV 膜性囊泡高质纯化试剂盒 | 10 次 |
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