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氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/21 13:45:00 阅读次数：25

氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒产品说明书

主要用途

氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂是一种旨在使用选择性P型和F型ATP酶抑制剂的条件下，通过质子荧光探针，应对膜性囊泡产生pH梯度变化，而进入囊泡内产生荧光淬灭，来分析和观察氢离子转运功能，进一步评价V型ATP酶中的H^＋ ATP酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体、真菌/酵母、植物等氢离子转运活性，即V型ATP酶的H^＋ ATP酶功能的检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞膜上的膜整合蛋白（integral membrane protein）参与细胞内外的物质传输、能量产生与转化等生物学过程，构成离子或代谢分子的通道，常见的包括氢离子、钠离子、钾离子等电解质，在能量依赖型或非依赖型的条件下，完成生理代谢的物质交换。膜通道转运功能检测（transport或uptake assay）用于分析转运蛋白（transport protein）和底物（substrate）的功能、筛选通道抑制剂、进而发现药物以及抗药性机制。建立分子构建的载体或宿主模型、分离膜性囊泡（membrane vesicle）包括正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）或内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV），通过标记底物的转运，来定量测定转运活性。氢离子膜通道转运功能，即氢离子泵功能（hydrogen pump），是ATP依赖性转运，通过ATP酶，包括V型，F型和P型ATP酶的H^＋或H^＋/K^＋ ATP酶等，达到细胞内的酸化环境和平衡。通过使用pH敏感性阳离子三环胺荧光染料丫啶橙（Acridine orange；AO），作为氢离子探针，在转运蛋白和ATP的存在下，产生pH梯度，即囊泡内酸化诱导，而转移到囊泡内，在膜内侧结合质子化（protonated），使绿色荧光淬灭（激发波长490nm，散发波长530nm），以分析转运蛋白V型、F型和P型ATP酶中H^＋或H^＋/K^＋ ATP酶的功能，以及其抑制剂的筛选。氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）检测通过使用P型ATP酶抑制剂正钒酸盐（orthovanadate）和F型ATP酶抑制剂寡霉素（oligomycin），来评价特异性V型ATP酶的H^＋ ATP酶功能。

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升

载体液（Reagent B）毫升

反应液（Reagent C）毫升

补充液（Reagent D）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证6月

用户自备

恒温水槽或培养箱：用于反应孵育

1毫升比色皿：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪：用于荧光定量分析

实验步骤

一、 样品准备

1．确定测定对象：动物/人体、真菌/酵母或植物

2．分离膜性囊泡（RSOV或IOV）（注意：建议使用系列分离试剂盒产品）

3．准备好待测的分离样品，置于冰槽里备用

二、 测定准备

1．开启并设定好荧光分光光度仪（温度为22℃）：激发波长为490nm，散发波长530nm，间隔30秒测读1次，持续10分钟至30分钟，并置零

2．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置于室温下冻融预热，避免光照。然后进行下列操作

三、 荧光测定

1．准备2个1毫升比色皿，并标记为对照样品管、抑制剂样品管

2．分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）

3．加入xx微升阴性液（Reagent D）到对照样品管

4．加入50微升用户自备的抑制剂（注意：使用各种浓度梯度）到抑制剂样品管

5．分别加入50微升待测样品（500微克蛋白）

6．在37℃恒温水槽孵育5分钟

7．分别加入xx微升载体液（Reagent B）

8．（选择步骤）放进荧光分光光度仪，测读1分钟

9．（选择步骤）取出比色皿

10．分别加入xx微升反应液（Reagent C）

11．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）

12．即刻放进荧光分光光度仪（激发波长为490nm，散发波长530nm）：获得0分钟和设定系列时间10分钟至30分钟的相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）――

RFU降低，表明氢离子转运功能活性增强

13．构建转运曲线：纵座标（Y）为相对荧光单位（RFU），横座标（X）为时间（分钟）

14．构建抑制曲线（设定终点30分钟）：纵座标（Y）为相对荧光单位（RFU），横座标（X）为抑制剂浓度（微摩尔）

15．构建百分率抑制曲线（设定30分钟）：纵座标（Y）为抑制百分率（％），横座标（X）为抑制剂浓度（微摩尔）

16．根据上述曲线，计算IC50（50％抑制率所需的抑制剂浓度）

注意事项

1．本产品为20次操作

2．操作时，须戴手套

3．建议用户使用本公司的膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒准备样品

4．孵育时，避免光照

5．建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析

6．用户根据实验情况，可以调整终点时间：10分钟、20分钟、30分钟

7．用户可以在某个时间点，加入抑制剂，观察转运走势变化

8．可以使用V型ATP酶抑制剂巴佛洛霉素A1（bafilomycin A1）作为抑制剂对照

9．本公司提供氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒－G&VS G&VS10159.2.3，即使用9-氨基-6-2-甲氧基吖啶（9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine；ACMA）荧光探针

10．本公司提供系列离子膜通道转运功能（transport/uptake）分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号名称规格

G&VS10159.1.3 氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒 20次

G&VS10159.1.3A 缓冲液（Reagent A）毫升

G&VS10159.1.3B 载体液（Reagent B）毫升

G&VS10159.1.3C 反应液（Reagent C）毫升

G&VS10159.1.3C 补充液（Reagent C）毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10159.1.1	氢离子膜通道转运功能（F型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10159.1.2	氢离子膜通道转运功能（P型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10159.1.3	氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10159.2.1	氢离子膜通道转运功能（F型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10159.2.2	氢离子膜通道转运功能（P型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10159.2.3	氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10169.1	动物细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS10169.2	动物组织膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS10169.3	真菌/酵母膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS10169.4	细菌膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS10169.5	红细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS16021	植物膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒	20次
G&VS10170	IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒	10次