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发布时间：2026/8/21 13:46:20 阅读次数：25
钙离子膜通道钙泵SERCA（P型ATP酶/内质网）功能荧光检测试剂盒
产品说明书
主要用途
钙离子膜通道钙泵SERCA（P型ATP酶/内质网）功能荧光检测试剂是一种旨在使用选择性内质网型钠钙交换体和线粒体钙泵抑制剂的条件下，通过钙离子荧光探针，探测在ATP的激发下，进入内质网内的钙离子，而产生荧光增强，来分析和观察内质网钙泵转运功能的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体、真菌/酵母、植物等内质网SERCA活性的检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
钙ATP酶（Ca＋＋-ATPase；EC3.6.3.8），是五类ATP酶（F、V、A、P和E型）中P型ATP酶（P type ATPase）之一。钙ATP酶又分成膜型（plasma membrane type；PMCA）、肌质网或内质网型（sarco/endoplasmic reticulum type；SERCA）、酵母高尔基型（yeast-Golgi type；PMR1）等。肌质网或内质网型钙ATP酶，又称为内质网钙泵，是一种膜上转运蛋白，将钙离子由胞浆转运到内质网钙池储存，调节胞内钙离子水平。Mag-Fluo--AM染料是一种钙离子低亲和性的荧光标记染料，特异性地由内质网捕获，可以检测内质网内的游离钙离子浓度的变化，进而分析内质网钙泵的作用模式，监测镁ATP诱导的钙离子摄入，来评价钙泵的功能。其基本检测步骤是，首先引入荧光探针到内质网，其次膜通透处理后，同步加入线粒体钙泵抑制剂FCCP、钠钙交换体（NCX）抑制剂benzamil和Mg-ATP，在荧光分光光度仪下（激发波长490nm，散发波长525nm）观察荧光峰值的变化。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液A（Reagent B1） 毫升
染色液B（Reagent B2） 微升
通透液（Reagent C） 微升
钙化液（Reagent D） 毫升
摄钙液（Reagent E） 微升
诱导液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；染色液B（Reagent B2）避免光照；有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于样品操作
恒温水槽或培养箱：用于反应孵育
100微升比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析
实验步骤
一、 测定准备
1． 开启并设定好荧光分光光度仪或荧光酶标仪（温度为22℃）：激发波长为490nm，散发波长525nm，间隔30秒测读1次，或动态测读，并置零
2． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置于室温下冻融预热，避免光照。然后进行下列操作
二、 荧光测定
（一） 间接法
1． 准备1个25cm2细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（1 X 106细胞数）
2． 小心抽去细胞培养液
3． 加入xx毫升 清理液（Reagent A），覆盖细胞表面
4． 小心抽去清理液（Reagent A）
5． 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面
6． 放进37℃培养箱孵育1分种
7． 轻轻抖动培养瓶，使细胞脱落
8． 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
9． 移入到15毫升锥形离心管
10． 放进台式离心机离心5分钟，速度为600g（注意：悬浮细胞可以从这一步开始操作）
11． 小心抽去上清液
12． 加入xx微升染色液A（Reagent B1），混匀细胞颗粒群
13． 加入xx微升染色液B（Reagent B2），混匀
14． 室温下孵育60分钟，避免光照
15． 放进台式离心机离心5分钟，速度为600g
16． 小心抽去上清液
17． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
18． 转移到1.5毫升离心管
19． 加入xx微升通透液（Reagent C）
20． 放进37℃培养箱，孵育4分钟（注意：这一步骤决定最大内质网钙池浓度读数；必要时可以调整孵育时间，既不能过长，导致细胞死亡，又不能过短，导致通透不足）
21． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g
22． 小心抽去上清液
23． 加入xx毫升钙化液（Reagent D），混匀细胞颗粒群
24． 室温下孵育5分钟
25． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g
26． 小心抽去上清液
27． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
28． 分别移取100微升到5个100微升比色皿或黑色96孔板的4个孔，标记为背景、诱导钙摄入、完全钙摄入、待测抑制剂
29． 按下表分别加入
|
| 背景 | 诱导钙摄入 | 完全钙摄入 | 待测抑制剂 |
| 清理液（Reagent A） | xx微升 | —— | —— | —— |
| 摄钙液（Reagent E） | —— | —— | xx微升 | —— |
| 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪，动态测读2分钟，然后取出比色皿或黑色96孔板，分别加入下列试剂 | ||||
| 用户自备的 待测抑制剂 | —— | —— | —— | xx微升 |
| 诱导液（Reagent F） | —— | xx微升 | —— | xx微升 |
| 意义 | 基础读数 | Mg-ATP依赖性 诱导摄入读数 | 最大内质网 钙池浓度读数 | SERCA抑制剂 摄入读数 |
30． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪，动态测读3分钟
31． 获得相对荧光读数（Relative Fluorescence Unit；RFU）
32． 分析结果
二、 直接法
1． 准备1个黑色96孔细胞培养板中4个孔的待测细胞，铺满率达70％（5 X 104细胞数/孔），分别标记为背景、诱导钙摄入、完全钙摄入、待测抑制剂
2． 小心抽去细胞培养液
3． 小心加入xx微升 清理液（Reagent A）
4． 小心抽去清理液（Reagent A）
5． 小心加入xx微升染色液A（Reagent B1）
6． 小心加入xx微升染色液B（Reagent B2）
7． 室温下孵育60分钟，避免光照
8． 小心抽去染色液
9． 加入xx微升清理液（Reagent A）
10． 加入xx微升通透液（Reagent C）
11． 放进37℃培养箱，孵育4分钟（注意：这一步骤决定最大内质网钙池浓度读数；必要时可以调整孵育时间，既不能过长，导致细胞死亡，又不能过短，导致通透不足）
12． 小心抽去通透液
13． 加入xx微升钙化液（Reagent D）
14． 室温下孵育5分钟
15． 小心抽去钙化液
16． 加入xx微升清理液（Reagent A）
17． 按下表分别加入
|
| 背景 | 诱导钙摄入 | 完全钙摄入 | 待测抑制剂 |
| 清理液（Reagent A） | xx微升 | —— | —— | —— |
| 摄钙液（Reagent E） | —— | —— | xx微升 | —— |
| 即刻放进荧光酶标仪，动态测读2分钟，然后取出黑色96孔板，分别加入下列试剂 | ||||
| 用户自备的 待测抑制剂 | —— | —— | —— | xx微升 |
| 诱导液（Reagent F） | —— | xx微升 | —— | xx微升 |
| 意义 | 基础读数 | Mg-ATP依赖性 诱导摄入读数 | 最大内质网 钙池浓度读数 | SERCA抑制剂 摄入读数 |
18． 即刻放进荧光酶标仪，动态测读3分钟
19． 获得相对荧光读数（Relative Fluorescence Unit；RFU）
20． 分析结果
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 孵育时，避免光照
4． 直接法，细胞换液时，避免使细胞脱落；如果细胞贴壁较松，建议使用间接法
5． 可以进行动态或定时荧光检测分析
6． 用户进行抑制剂筛选，建议使用浓度梯度
7． 可以使用SERCA抑制剂毒胡萝卜素（thapsigargin；TG）作为抑制剂对照
8． 钙离子转运曲线参考图像如下：
∣基础∣ 钙摄入曲线 ∣
9． 本公司提供系列钙离子膜通道转运功能（transport/uptake）分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10162.1.3 钙离子膜通道钙泵SERCA功能荧光检测试剂盒 20次
G&VS10162.1.3A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10162.1.3B 染色液A（Reagent B1） 毫升
G&VS10162.1.3C 染色液B（Reagent B2） 微升
G&VS10162.1.3D 通透液（Reagent C） 毫升
G&VS10162.1.3E 钙化液（Reagent D） 毫升
G&VS10162.1.3F 摄钙液（Reagent E） 毫升
G&VS10162.1.3G 诱导液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10162.1.1 | 钙离子膜通道钙泵（F型ATP酶/线粒体、叶绿体）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10162.1.2 | 钙离子膜通道钙泵PMCA（P型ATP酶/质膜）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10162.1.3 | 钙离子膜通道钙泵SERCA（P型ATP酶/内质网）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10162.2.1 | 钙离子膜通道钠钙交换体（NCX/线粒体）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10162.2.2 | 钙离子膜通道钠钙交换体（NCX/质膜）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10162.2.3 | 钙离子膜通道钠钙交换体（NCX/内质网）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10188 | 钙离子膜通道内质网利罗丁受体（ryanodine receptor；RyR）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10189 | 钙离子膜通道内质网肌醇1,4,5-三磷酸受体（IP3R）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10257 | 钙离子膜通道二氢吡啶受体（DHPR）功能荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10258 | 钙泵PMCA蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10259 | 钙泵SERCA蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10260 | 钙钠交换体NCX蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10261 | RyR受体蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10262 | IP3R受体蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10263 | DHPR受体蛋白表达检测试剂盒 | 20次 |
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