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钙离子膜通道钠钙交换体（NCX/内质网）功能荧光检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/21 13:49:51 阅读次数：44

钙离子膜通道钠钙交换体(NCX/内质网)功能荧光检测试剂盒产品说明书

主要用途

钙离子膜通道钠钙交换体(NCX/内质网)功能荧光检测试剂是一种旨在使用选择性内质网型钙 ATP 酶、钠钾 ATP 酶和线粒体钙泵抑制剂的条件下，通过钙离子荧光探针，探测在 ATP 的激发下，进入内质网内的钙离子，而产生荧光增强，来分析和观察内质网钠钙交换体转运功能的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体、真菌/酵母、植物等内质网钠钙交换体活性的检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

钠钙交换体( sodium-calcium exchanger；Na+-Ca++ exchanger；NCX)是一种反向协同膜蛋白(antiporter membrane protein)，常见于兴奋细胞的细胞膜上和线粒体或内置网上，使钙离子排出胞浆外或进入细胞器，通过移除 1 分子钙离子，交换进入 3 分子钠离子，达到细胞钙离子微环境稳态平衡，以控制神经分泌、光敏受体活性、心肌松弛、以及兴奋-收缩偶联等功能。钠钙交换体和钙ATP酶不同，其与钙离子的亲和力低。钠钙交换体有 5 种异构体： NCX1 、NCX2 、NCX3 、NCX-SQ1 、CALX。钠钙交换体异常与心肌缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury)有关。 KB R7943 、SEA0400 和SN-6 等是钠钙交换体选择性抑制剂，具有治疗心肌缺血、心律失常、心衰和高血压的药理价值。染料是一种钙离子低亲和性的荧光标记染料，特异性地由内质网捕获，可以检测内质网内的游离钙离子浓度的变化，进而分析内质网钠钙交换体的作用模式，监测镁ATP诱导的钙离子摄入，来评价钠钙交换体的功能。其基本检测步骤是，首先引入荧光探针到内质网，其次膜通透处理后，同步加入线粒体钙泵抑制剂FCCP、内质网型钙ATP酶抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin；TG)、钠钾ATP酶抑制剂乌本苷(ouabain)和Mg-ATP，在荧光分光光度仪下(激发波长 490nm，散发波长 525nm)观察荧光峰值的变化。

产品内容

清理液(Reagent A)

染色液(Reagent B)

通透液(Reagent C)

钙化液(Reagent D)

摄钙液(Reagent E)

诱导液(Reagent F)

产品说明书

保存方式

保存清理液(Reagent A)在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；染色液(Reagent B) 避免光照；有效保证 6 月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052)：用于细胞处理所需的培养基

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品操作

恒温水槽或培养箱：用于反应孵育

100 微升比色皿或酶标板：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤

一、测定准备

1 ．开启并设定好荧光分光光度仪或荧光酶标仪(温度为 22℃)：激发波长为 490nm，散发波长 525nm，间隔 30 秒测读 1 次，或动态测读，并置零

2 ．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置于室温下冻融预热，避免光照。然后进行下列操作

二、荧光测定

(一) 间接法

1 ．准备 1 个 25cm2细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达 70％(1 X 106细胞数)

2 ．小心抽去细胞培养液

3 ．加入 3 毫升清理液(Reagent A)，覆盖细胞表面

4 ．小心抽去清理液(Reagent A)

5 ．加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面

6 ．放进 37℃培养箱孵育 1 分种

7 ．轻轻抖动培养瓶，使细胞脱落

8 ．加入 3 毫升用户自备的完全细胞培养液

9 ．移入到 15 毫升锥形离心管

10．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g (注意：悬浮细胞可以从这一步开始操作)

11．小心抽去上清液

12．加入 500 微升染色液(Reagent B)，混匀细胞颗粒群

13．室温下孵育 60 分钟，避免光照

14．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

15．小心抽去上清液

16．加入 1 毫升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群

17．转移到 1.5 毫升离心管

18．加入 10 微升通透液(Reagent C)

19．放进 37℃培养箱，孵育 4 分钟(注意：这一步骤决定最大内质网钙池浓度读数；必要时可以调整孵育时间，既不能过长，导致细胞死亡，又不能过短，导致通透不足)

20．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

21．小心抽去上清液

22．加入 1 毫升钙化液(Reagent D)，混匀细胞颗粒群

23．室温下孵育 5 分钟

24．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

25．小心抽去上清液

26．加入 500 微升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群

27．分别移取 100 微升到 5 个 100 微升比色皿或酶标板的5 个孔，标记为背景、诱导钙摄入、完全钙摄入、待测抑制剂

28．按下表分别加入

	背景	诱导钙摄入	完全钙摄入	待测抑制剂
清理液 (Reagent A)	5 微升	——	——	——
摄钙液 (Reagent E)	——	——	5 微升	——
即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪，动态测读 2 分钟，然后取出比色皿或酶标板，分别加入下列试剂
用户自备的待测抑制剂	——	——	——	5 微升
诱导液 (Reagent F)	——	5 微升	——	5 微升
意义	基础读数	Mg-ATP 依赖性诱导摄入读数	最大内质网钙池浓度读数	NCX 抑制剂摄入读数

29. 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪，动态测读 3 分钟

30. 获得相对荧光读数(Relative Fluorescence Unit；RFU)

31. 分析结果

1) (诱导钙摄入RFU—背景RFU)：荧光差值越高，表明NCX转运功能活性越强

2) 【(诱导钙摄入RFU—背景RFU) ÷ (完全钙摄入RFU—背景RFU)】X 100%=诱导钙摄入百分率：百分率越高，表明NCX转运功能活性越强

3) 构建转运曲线：纵座标(Y) 为钙摄入相对荧光单位(RFU)，横座标(X) 为时间(秒)(注意：参见注意事项 8)

4) 构建抑制曲线：纵座标(Y)为荧光差值 RFU，横座标(X)为抑制剂浓度(微摩尔)

5) 根据上述曲线，计算 IC50 (50％抑制率所需的抑制剂浓度)

二、直接法

1．准备 1 个 96 孔细胞培养板中5 个孔的待测细胞，铺满率达 70％(5 X 104细胞数/孔)，分别标记为背景、诱导钙摄入、完全钙摄入、待测抑制剂

2．小心抽去细胞培养液

3．小心加入 200 微升清理液(Reagent A)

4．小心抽去清理液(Reagent A)

5．小心加入 100 微升染色液(Reagent B)

6．室温下孵育 60 分钟，避免光照

7．小心抽去染色液

8．加入 200 微升清理液(Reagent A)

9．加入 2 微升通透液(Reagent C)

10．放进 37℃培养箱，孵育 4 分钟(注意：这一步骤决定最大内质网钙池浓度读数；必要时可以调整孵育时间，既不能过长，导致细胞死亡，又不能过短，导致通透不足)

11．小心抽去通透液

12．加入 100 微升钙化液(Reagent D)

13．室温下孵育 5 分钟

14．小心抽去钙化液

15．加入 200 微升清理液(Reagent A)

16．按下表分别加入

	背景	诱导钙摄入	完全钙摄入	待测抑制剂
清理液 (Reagent A)	5 微升	——	——	——
摄钙液 (Reagent E)	——	——	5 微升	——
即刻放进荧光酶标仪，动态测读 2 分钟，然后取出酶标板，分别加入下列试剂
用户自备的待测抑制剂	——	——	——	5 微升
诱导液 (Reagent F)	——	5 微升	——	5 微升
意义	基础读数	Mg-ATP 依赖性诱导摄入读数	最大内质网钙池浓度读数	NCX 抑制剂摄入读数

17．即刻放进荧光酶标仪，动态测读 3 分钟

18．获得相对荧光读数(Relative Fluorescence Unit；RFU)

19．分析结果

1) (诱导钙摄入RFU—背景RFU)：荧光差值越高，表明NCX转运功能活性越强

2) 【(诱导钙摄入RFU—背景RFU) ÷ (完全钙摄入RFU—背景RFU)】X 100%=诱导钙摄入百分率：百分率越高，表明NCX转运功能活性越强

3) 构建转运曲线：纵座标(Y) 为钙摄入相对荧光单位(RFU)，横座标(X) 为时间(秒)(注意：参见注意事项 8)

4) 构建抑制曲线：纵座标(Y)为荧光差值 RFU，横座标(X)为抑制剂浓度(微摩尔)

5) 根据上述曲线，计算 IC50 (50％抑制率所需的抑制剂浓度)

注意事项

1 ．本产品为 20 次操作

2 ．操作时，须戴手套

3 ．孵育时，避免光照

4 ．直接法，细胞换液时，避免使细胞脱落；如果细胞贴壁较松，建议使用间接法

5 ．可以进行动态或定时荧光检测分析

6 ．用户进行抑制剂筛选，建议使用浓度梯度

7 ．可以使用 NCX 抑制剂毒 BENZAMIL 作为抑制剂对照

8 ．钙离子转运曲线参考图像如下：

∣基础∣ 钙摄入曲线 ∣

9 ．本公司提供系列钙离子膜通道转运功能(transport/uptake)分析试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10162. 1. 1	钙离子膜通道钙泵(F 型 ATP 酶/线粒体、叶绿体)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10162. 1.2	钙离子膜通道钙泵 PMCA (P 型 ATP 酶/质膜)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10162. 1.3	钙离子膜通道钙泵 SERCA (P 型 ATP 酶/内质网)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10162.2. 1	钙离子膜通道钠钙交换体(NCX/线粒体)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10162.2.2	钙离子膜通道钠钙交换体(NCX/质膜)功能荧光检测试剂盒	20 次

G&VS10162.2.3	钙离子膜通道钠钙交换体(NCX/内质网)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10188	钙离子膜通道内质网利罗丁受体(ryanodinereceptor；RyR)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10189	钙离子膜通道内质网肌醇 1,4,5-三磷酸受体(IP3R)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10257	钙离子膜通道二氢吡啶受体(DHPR)功能荧光检测试剂盒	20 次
G&VS10258	钙泵 PMCA 蛋白表达检测试剂盒	20 次
G&VS10259	钙泵 SERCA 蛋白表达检测试剂盒	20 次
G&VS10260	钙钠交换体 NCX 蛋白表达检测试剂盒	20 次
G&VS10261	RyR 受体蛋白表达检测试剂盒	20 次
G&VS10262	IP3R 受体蛋白表达检测试剂盒	20 次
G&VS10263	DHPR 受体蛋白表达检测试剂盒	20 次