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发布时间：2026/8/21 13:53:01 阅读次数：55
真菌/酵母细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒产品说明书
主要用途
真菌/酵母细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂是一种旨在通过差速离心技术从真菌/酵母细胞中分离出各种正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种野生型或培养真菌/酵母细胞的膜性囊泡的制备。其制备物产量高，可以被用于膜通道、信号传导机制、膜蛋白分布等研究。产品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。
技术背景
膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通过去除细胞浆内容物，使之失去细内在的代谢系统，同时保持质膜的原始位相，有利于提供适合的底物，不会受到降解和代谢，建立动力机制，进行转运或摄入研究，例如微粒体组分用于V型ATP酶研究、线粒体组分用于F型ATP酶研究。而内侧外翻膜性囊泡是通过裂解细胞和细胞器后，质膜重新闭合形成内侧面外翻的囊泡状结构，广泛用于原发性转运系统的研究。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
平衡液（Reagent B） 毫升
保存液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
4℃超速离心机：用于分离膜性囊泡
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
实验步骤
一、正常外向膜性囊泡分离（线粒体和微粒体）
1． 准备好50毫升新鲜真菌/酵母样品
2． 在分光光度仪上测OD600＝1.0（1 OD＝1 X 107细胞/毫升；总量为5 X 108细胞）
3． 转移到预冷的50毫升锥形离心管
4． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入适量的xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
7． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
8． 小心抽去上清液
9． 即刻放入液氮罐过夜
10． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎细胞成粉末（注意：切莫使细胞冻融）
11． 放进一个15毫升锥形离心管
12． 加入xx毫升预冷的平衡液（Reagent B）
13． 涡旋震荡5秒，充分混匀
14． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
15． 在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）
16． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
17． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
18． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g
20． 小心移出上清液到2个新的1.5毫升离心管，同时保留沉淀颗粒
21． 加入xx微升保存液（Reagent C）到沉淀颗粒管――
22． 将含有上清液的2个1.5毫升离心管放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g
23． 小心抽去上清液
24． 分别加入xx微升保存液（Reagent C）――
25． 移取10微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
26． 即刻放进－70℃冰箱里保存
二、内侧外翻膜性囊泡分离（质膜分离）
1． 准备好50毫升新鲜真菌/酵母样品
2． 在分光光度仪上测OD600＝1.0（1 OD＝1 X 107细胞/毫升；总量为5 X 108细胞）
3． 转移到预冷的50毫升锥形离心管
4． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入适量的xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
7． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
8． 小心抽去上清液
9． 即刻放入液氮罐过夜
10． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎细胞成粉末（注意：切莫使细胞冻融）
11． 放进一个15毫升锥形离心管
12． 加入xx毫升预冷的平衡液（Reagent B）
13． 涡旋震荡5秒，充分混匀
14． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
15． 在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）
16． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
17． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
18． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心30分钟，速度为10000g
20． 小心抽去上清液
21． 加入xx微升保存液（Reagent C）――
22． 连续－70℃至37℃冻融4次――
23． 移取10微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
24． 即刻放进－70℃冰箱里保存
25． （选择步骤）进行IOV组分纯化（建议使用 IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒－G&VS10170）
注意事项
1． 本产品为20次（50毫升菌液：1克细胞湿重或5 X 108细胞）操作
2． 所有操作均须在4℃或以下状态进行
3． 建议使用足够的样品量
4． 通常5 X 108细胞的微粒体组分含量为50毫克蛋白，线粒体组分含量5毫克蛋白，100毫克质膜
5． 质膜IOV组分为粗提分离产物，其中含有RSOV和未予闭合的质膜不等，如果需要获得95％以上的高纯度的IOV，建议使用 IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒－G&VS10170
6． 纯化的样品避免反复冻融
7． 本公司提供系列离子膜通道转运功能（transport/uptake）分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定分离组分维持正常活性
3． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10169.3 真菌/酵母细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 20次
G&VS10169.3A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10169.3B 平衡液（Reagent B） 毫升
G&VS10169.3C 保存液（Reagent C） 毫升
G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10159.1.1 | 氢离子膜通道转运功能（F型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10159.1.2 | 氢离子膜通道转运功能（P型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10159.1.3 | 氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）绿色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10159.2.1 | 氢离子膜通道转运功能（F型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10159.2.2 | 氢离子膜通道转运功能（P型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10159.2.3 | 氢离子膜通道转运功能（V型ATP酶）蓝色荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.1 | 动物细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.2 | 动物组织膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.3 | 真菌/酵母细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.4 | 细菌膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.5 | 红细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS16021 | 植物膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10170 | IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒 | 10次 |
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