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发布时间：2026/8/21 13:53:49 阅读次数：32
细胞内蛋白质硝基化（protein nitration）比色法测定试剂盒产品说明书
主要用途
细胞内蛋白质硝基化（protein nitration）比色法测定试剂是一种旨在使用多克隆抗3-硝基酪氨酸抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，通过染料四甲基联苯胺染色显示蓝色，即通过比色法定量评价蛋白质硝基化水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体等）的蛋白质硝基化的定量分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡、肿瘤等的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
蛋白质硝基化（protein nitration）是一种氧化损伤或一氧化氮损伤的标志，分成过氧亚硝基离子（peroxynitrite；ONOO）途径和非过氧亚硝基离子途径。其中一氧化氮和超氧阴离子反应，产生强氧化剂（芳香类有机硫化合物）或硝化剂过氧亚硝基离子，通过直接作用或金属离子催化或二氧化碳协助等，主要将酪氨酸残基硝基化为稳定的3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine；3-NT），影响蛋白质结构和功能，例如蛋白磷酸化和信号通路，损伤DNA、蛋白质和脂类分子，导致动脉粥样硬化、急性肺损伤、败血症、休克、缺血再灌注损伤、肠道感染、帕金森症、多发性硬化症、肾器官移植排斥、慢性肾衰、关节炎、阿茨汉姆症、高血压、亨廷顿症、自发免疫性心肌炎，以及衰老等疾病发生。四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine，TMB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化物酶的催化下，电子供体TMB底物在过氧化氢氧化下失去电子，产生游离自由阳离子单电子氧化产物，在pH4.9条件下，呈现出颜色变化和沉积，形成蓝色沉淀产物，且不受乙醇影响。被用于检测标记过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
通透液（Reagent C） 毫升
封阻液（Reagent D） 毫升
抗体液（Reagent E） 毫升
二抗液（Reagent F） 毫升
染色液（Reagent G） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，严禁反复冻融；通透液（Reagent C）和染色液（Reagent G），具有挥发性，注意密闭瓶盖；染色液（Reagent G）避免光照；有效保证6月
用户自备
96孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个96孔细胞培养板
2． 接种待测细胞（2 X 104细胞）
3． 小心抽去细胞培养液
4． 加入xx微升清理液（Reagent A），铺满培养表面
5． 小心抽去清理液（Reagent A）
6． 加入xx微升固着液（Reagent B）
7． 室温下孵育5分钟
8． 小心抽去固着液（Reagent B）
9． 加入xx微升清理液（Reagent A）
10． 室温下孵育2分钟
11． 小心抽去清理液（Reagent A）
12． 加入xx微升－20℃预冷的通透液（Reagent C）
13． 置于－20℃冰箱里孵育5分钟
14． 小心抽去通透液（Reagent C）
15． 空气中晾干
16． 加入xx微升清理液（Reagent A）
17． 室温下孵育2分钟
18． 小心抽去清理液（Reagent A）
19． 加入xx微升封阻液（Reagent D）
20． 室温下孵育60分钟
21． 小心抽去封阻液（Reagent D）
22． 加入xx微升清理液（Reagent A）
23． 室温下孵育2分钟
24． 小心抽去清理液（Reagent A）
25． 重复实验步骤22至24一次
26． 加入xx微升抗体液（Reagent E）
27． 置于37℃培养箱里孵育60分钟 （或4℃冰箱里孵育过夜）
28． 小心抽去抗体液（Reagent E）
29． 加入xx微升清理液（Reagent A）
30． 置于37℃培养箱里孵育2分钟
31． 小心抽去清理液（Reagent A）
32． 重复实验步29至31二次
33． 加入xx微升二抗液（Reagent F）
34． 置于37℃培养箱里孵育60分钟，避免光照
35． 小心抽去二抗液（Reagent F）
36． 加入xx微升清理液（Reagent A）
37． 置于37℃培养箱里孵育2分钟
38． 小心抽去清理液（Reagent A）
39． 重复实验步36至38二次
40． 小心加入xx微升的染色液（Reagent G）
41． 室温下孵育30分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
42． 即刻放进酶标仪测读：波长650nm
43． 构建细胞-蛋白质硝基化曲线：纵座标（Y轴）吸光值（OD）为蛋白质硝基化程度；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等
注意事项
1． 本产品为20次操作量
2． 通透液（Reagent C）和染色液（Reagent G），具有挥发性，注意密闭瓶盖
3． 操作时，须戴手套
4． 细胞培养操作时，须严格无菌，以防污染
5． 孵育时，须避免光照
6． 染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
7． 如果染色过快或过深，建议稀释一抗和二抗浓度
8． 如果用户没有650nm的滤波器，可以使用630至650之间的任一波长
9． 建议细胞染色完成后，即刻进行比色分析
10． 本公司提供系列蛋白质硝基化检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10172.1 细胞内蛋白质硝基化比色法测定试剂盒 20次
G&VS10172.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10172.1B 固着液（Reagent B） 毫升
G&VS10172.1C 变性液（Reagent C） 毫升
G&VS10172.1D 封阻液（Reagent D） 毫升
G&VS10172.1IE 抗体液（Reagent E） 毫升
G&VS10172.1JF 二抗液（Reagent F） 毫升
G&VS10172.1G 染色液（Reagent G） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10172.1 | 细胞内蛋白质硝基化（protein nitration）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10172.2 | 细胞内蛋白质硝基化（protein nitration）流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10172.3 | 蛋白质硝基化（protein nitration）ELISA分析试剂盒 | 48/96次 |
| G&VS10172.4 | 冰冻切片蛋白质硝基化（protein nitration）荧光染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10172.5 | 石蜡切片蛋白质硝基化（protein nitration）荧光染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10172.6 | 蛋白质硝基化（protein nitration）高效液相色谱（HPLC）分析试剂盒 | 20次 |
| G&VS10171.7 | 体外蛋白质硝基化处理试剂盒 | 20次 |
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