当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2026/8/26 17:26:39 阅读次数：29
细胞AKT/PKB蛋白表达比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞AKT/PKB蛋白表达比色法定量检测试剂是一种旨在运用抗AKT/PKB单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，通过染料四甲基联苯胺染色显示蓝色，即通过比色法定量评价AKT/PKB蛋白表达水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（人体、大鼠、小鼠等）的AKT/PKB蛋白表达水平分析。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
蛋白激酶B（protein kinase B；PKB；EC2.7.11.1），又称为v-akt鼠源胸腺瘤病毒肿瘤基因同源体（v-akt murine thymoma viral oncogene homolog；Akt），是高度同源的PKB/AKT家属（PKBα/Akt1、PKBβ/Akt2、PKBγ/Akt3）中的一员，属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家属的成员，是哺乳动物细胞信号的重要分子之一。高度同源的PKB/AKT家属有3个同工酶：PKBα/Akt1、PKBβ/Akt2、PKBγ/Akt3，它们具有广泛的组织分布。作为一种生长因子调节蛋白激酶，受到各种生长因子（VEGF、PDGF、EGF、IGF-1等）、细胞因子、胰岛素、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor；TNF）、性类固醇（雌激素、催乳素等）激活。PKB/AKT含有普列克底物蛋白同源（pleckstrin homology；PH）的结构域、激酶结构域和羧基末端调节域。PH结构域与磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide 3-OH kinase；PI3K）产物，例如磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸（PI3,4P2）和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PI3,4,5P2）结合，使PKB/Akt转位到细胞膜上，受到肌醇磷脂依赖性激酶1（phosphoinoside-dependent kinase 1；PDK1）的磷酸化而激活，进入细胞核，达到调控细胞繁殖、存活、分化、迁移、葡萄糖代谢（糖原合成、糖酵解、葡萄糖吸收等）、基因转录、诱导蛋白合成通路、抑制BAD、Caspase-9、IKKα、forkhead transcription factor、GSK3等的功能。其表达异常，与骨骼肌肥大、胰腺癌、卵巢癌、乳房癌等肿瘤发展、组织生长等有关。PKB/Akt已经成为治疗肿瘤和糖尿病等的药物靶标。使用免疫组化方法，即运用抗AKT/PKB单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，通过生色底物染料四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine，TMB）染色显示蓝色，来定量评价AKT/PKB蛋白表达水平。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
封阻液（Reagent C） 毫升
抗体液（Reagent D） 毫升
二抗液（Reagent E） 毫升
染色液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存固着液（Reagent B）、封阻液（Reagent C）、抗体液（Reagent D）、二抗液（Reagent E）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和二抗液（Reagent E）严禁反复冻融；染色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
用户自备
96孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个96孔细胞培养板的待测细胞（2 X 104细胞/孔）
2． 小心抽去细胞培养液
3． 加入xx微升清理液（Reagent B），铺满培养表面
4． 小心抽去清理液（Reagent B）
5． 加入xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent C）
6． 置于－20℃冰箱里孵育20分钟
7． 小心抽去固着液（Reagent C）
8． 空气中晾干
9． 加入xx微升清理液（Reagent B）
10． 室温下孵育2分钟
11． 小心抽去清理液（Reagent B）
12． 加入xx微升封阻液（Reagent D）
13． 置于37℃培养箱里孵育30分钟
14． 小心抽去封阻液（Reagent D）
15． 加入xx微升抗体液（Reagent E）
16． 置于37℃培养箱里孵育30分钟
17． 小心抽去抗体液（Reagent E）
18． 加入xx微升清理液（Reagent B）
19． 置于37℃培养箱里孵育5分钟
20． 小心抽去清理液（Reagent B）
21． 重复实验步18至20一次
22． 加入xx微升二抗液（Reagent F）
23． 置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照
24． 小心抽去二抗液（Reagent F）
25． 加入xx微升清理液（Reagent B）
26． 置于37℃培养箱里孵育5分钟
27． 小心抽去清理液（Reagent B）
28． 重复实验步25至27二次
29． 小心加入xx微升的染色液（Reagent G）
30． 室温下孵育30分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
31． 即刻放进酶标仪测读：波长650nm
32． 构建蛋白表达曲线：纵座标（Y轴）为蛋白表达吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等
注意事项
1． 本产品为10次操作量
2． 操作时，须戴手套
3． 细胞培养操作时，须严格无菌，以防污染
4． 孵育时，须避免光照
5． 染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
6． 如果染色过快或过深，建议稀释一抗和二抗浓度
7． 如果用户没有650nm的滤波器，可以使用630至650之间的任一波长
8． 建议细胞染色完成后，即刻进行比色分析
9． 本公司提供系列AKT/PKB检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10205.8 细胞AKT/PKB蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10次
G&VS10205.8A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10205.8B 固着液（Reagent B） 毫升
G&VS10205.8C 封阻液（Reagent C） 毫升
G&VS10205.8D 抗体液（Reagent D） 毫升
G&VS10205.8E 二抗液（Reagent E） 毫升
G&VS10205.8F 染色液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10205.1 | 细胞AKT/PKB蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.2 | 载玻片细胞AKT/PKB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.3 | 冰冻切片组织AKT/PKB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.4 | 石蜡切片组织AKT/PKB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.5 | 载玻片细胞AKT/PKB蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.6 | 冰冻切片组织AKT/PKB蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.7 | 石蜡切片组织AKT/PKB蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10205.8 | 细胞AKT/PKB蛋白表达比色法定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10205.9 | 细胞AKT/PKB蛋白表达荧光定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10205.10 | AKT/PKB蛋白表达西方杂交分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10205.11 | AKT/PKB蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10205.12 | AKT/PKB蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 | 25次 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-7
