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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/26 18:40:26 阅读次数：20

细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过底物氯霉素，通过氯霉素乙酰基转移酶的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到氯霉素分子上的过程中，释放出巯基辅酶A，进而使用巯基荧光探针，产生高度荧光产物，即采用荧光法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的活体细胞外源性氯霉素乙酰基转移酶活性分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便。

技术背景

氯霉素乙酰基转移酶（chloroamphenicol acetyltransferase； CAT）为细菌氯霉素抗性基因，通过乙酰化氯霉素上一个或两个羟基基团，使之失活。氯霉素乙酰基转移酶基因也是目前常用的哺乳动物基因表达的报告基因，用于分析转染后动物或植物细胞转录元素或启动子表达的水平状况。基于底物氯霉素（chloroamphenicol），通过氯霉素乙酰基转移酶的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到氯霉素分子上，由此产生乙酰化氯霉素（3-acetoxy chloramphenicol）和巯基辅酶A（CoA-SH），终止反应后，与巯基荧光探针7-二乙基胺基马来酰亚胺苯基甲基香豆素（7-diethylamino-3-（4-maleimidylphenyl）-methylcoumarin；CPM）反应，产生高度荧光产物，在荧光分光光度仪下检测（激发波长360-390nm，散发波长450-470nm），来定量测定氯霉素乙酰基转移酶的特异活性。其反应系统为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

反应液（Reagent D）微升

底物液（Reagent E）毫升

终止液（Reagent F）毫升

染色液（Reagent G）毫升

标准液（Reagent H）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存反应液（Reagent D）、底物液（Reagent E）、染色液（Reagent G）和标准液（Reagent H）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent G）避免光照，有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器

细胞刮脱棒：用于细胞脱离

超声仪：用于裂解细胞

（微型）台式离心机：用于细胞预处理

黑色96孔板或200微升1厘米光径比色皿：用于反应和荧光分析的容器

荧光酶标仪或荧光分光光度仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。

一、样品准备

1．准备好75cm²细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 10⁷细胞）

2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面

3．小心抽去清理液

4．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）

5．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞

6．移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

7．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g

8．小心抽去上清液

9．加入xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀

10．转移到预冷的1.5毫升离心管

11．强力涡旋震荡15秒

12．置于超声仪下超声处理：200瓦，50%功率，10秒一次，间隙1分钟，重复3次（注意：冰上操作）

13．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

14．小心移取200微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

15．（选择步骤）放进60℃恒温水槽孵育10分钟

16．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

17．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、 测定准备

1．准备好待测样品（例如细胞裂解悬液等），置于冰槽里

2．设定好荧光分光光度仪（温度为30℃）：激发波长370nm，散发波长460nm，并置零

3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

4．分别加入xx微升缓冲液（Reagent C）到每个离心管

5．移取xx微升标准液（Reagent H）到1号管，混匀

6．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀

7．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀

8．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀

9．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent C）	标准液（Reagent H）	标准巯基浓度
1	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
2	xx微升	xx微升1号管	xx微摩尔/升
3	xx微升	xx微升2号管	xx微摩尔/升
4	xx微升	xx微升3号管	xx微摩尔/升
5	xx微升	空对照	0

三、标准曲线测定

1．移取50微升上述配制的标准液到新的比色皿或黑色96孔板

2．加入xx微升终止液（Reagent F）

3．加入xx微升染色液（Reagent G），混匀

4．在30℃温度下孵育15分钟，避免光照

5．即刻放进荧光分光光度仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

6．（选择步骤）重复实验步骤1至5，测读完所有标准样品

7．标准样实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

8．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准巯基浓度（微摩尔/升）

四、样品活性测定

1．标记好样本背景和样本活性管

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿或黑色96孔板

3．加入xx微升缓冲液（Reagent C）到样本背景管

4．加入xx微升反应液（Reagent D）到样本活性管

5．分别加入xx微升底物液（Reagent E）到所有管

6．分别加入10微升待测样品（注意：50微克核蛋白；样品须清澈）到所有管

7．上下倾倒数次，混匀

8．在30℃温度下孵育10分钟

9．分别加入xx微升终止液（Reagent F）到所有管

10．分别加入xx微升染色液（Reagent G）到所有管，混匀

11．在30℃温度下孵育15分钟，避免光照

12．即刻放进荧光分光光度仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

13．样品实际荧光单位：样品活性相对荧光读数－样品背景相对荧光读数—5号管标准样荧光读数（作为空对照）

14．根据标准曲线获得样品活性对应巯基浓度（微摩尔/升）

五、 计算样品实际活性

注意事项

1．本产品为20次操作，包括背景对照

2．操作时，须戴手套

3．样品须澄清，至关重要

4．样品处理时，避免使用巯基乙醇、DTT等

5．孵育反应完成后即刻进行荧光测定

6．滤波器可以使用激发波长360至390nm和散发波长450至470nm之间的任一波长

7．测定值由低到高变化

8．测定值荧光读数越高，表明酶活性越高

9．荧光测定后，比色皿须清洗彻底

10．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为50微克/10微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

12．氯霉素乙酰基转移酶单位活性定义为：在30℃，pH 7.8条件下，每分钟内能够释放1纳摩尔巯基辅酶A所需的酶量作为一个活性单位

13．本公司提供系列氯霉素乙酰基转移酶检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS10190.1 细胞氯霉素乙酰基转移酶报告基因活性荧光定量检测试剂盒 20次

G&VS10190.1A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10190.1B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10190.1C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS10190.1D 反应液（Reagent D）毫升

G&VS10190.1E 底物液（Reagent E）毫升

G&VS10190.1F 终止液（Reagent F）毫升

G&VS10190.1G 染色液（Reagent G）毫升

G&VS10190.1H 标准液（Reagent H）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10064.1.1	细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性同位素定量检测试剂盒	20次
G&VS10064.1.2	组织氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性同位素定量检测试剂盒	20次
G&VS10064.2.1	细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性同位素薄层色谱（TLC）检测试剂盒	20次
G&VS10064.2.2	组织氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性同位素薄层色谱（TLC）检测试剂盒	20次
G&VS10190.1	细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10190.2	组织氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS10191.1	细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光薄层色谱（TLC）检测试剂盒	20次
G&VS10191.2	组织氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性荧光薄层色谱（TLC）检测试剂盒	20次
G&VS10553.1	细胞氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10553.2	组织氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因活性比色法定量检测试剂盒	20次