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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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组织超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/26 18:50:54 阅读次数：24

组织超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

组织超氧阴离子荧光法定量检测试剂是一种旨在通过荧光染色剂二氢溴化乙啶，与组织细胞氧化损伤后产生的超氧化物阴离子发生反应，产生具有红色荧光的二羟基溴化乙啶，即采用荧光法来测定组织裂解萃取样品中超氧阴离子活性氧族含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体、昆虫等）超氧阴离子活性氧族的含量检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）是超氧自由基阴离子特异性荧光探针。一旦与超氧自由基阴离子发生反应，产生具有红色荧光的二羟基溴化乙啶（2-OH-ethidium）产物，在荧光分光光度仪下（激发波长540nm，散发波长590nm），来定量测定超氧自由基阴离子的含量。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

染色液（Reagent C）微升

碱性液（Reagent D）微升

萃取液（Reagent E）毫升

中和液（Reagent F）微升

缓冲液（Reagent G）毫升

反应液（Reagent H）毫升

底物液（Reagent I）微升

标准液（Reagent J）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent C）、反应液（Reagent H）、底物液（Reagent I）和标准液（Reagent J）在－20℃冰箱里；染色液（Reagent C）和标准液（Reagent J）严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；碱性液（Reagent D）萃取液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解样品

比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤

一、 样品准备

1．手术取出动物组织，并秤重以确定50毫克组织重量

2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入XX毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4．即刻用刀片切碎组织

5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6．加入XX微升预冷的裂解液（Reagent B）

7．涡旋震荡5秒，充分混匀

8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

9．在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）

10．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管

11．（选择步骤）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

12．加入XX微升染色液（Reagent C）

13．涡旋震荡10秒

14．室温下孵育60分钟，避免光照

15．加入XX微升碱性液（Reagent D）

16．涡旋震荡10秒

17．加入XX微升预冷的萃取液（Reagent E）

18．涡旋震荡10秒

19．加入XX微升中和液（Reagent F）

20．放进冰槽里待测

二、测定准备

1．设定好荧光酶标仪（双通道）：激发波长370nm，散发波长420nm和激发波长540nm，散发波长590nm；并置零

2．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

3．分别加入XX微升缓冲液（Reagent G）到每个离心管

4．移取XX微升标准液（Reagent J）到1号管，混匀

5．小心移取XX微升1号管稀释的标准液（Reagent J）到2号管，混匀

6．小心移XX微升2号管稀释的标准液（Reagent J）到3号管，混匀

7．小心移取XX微升3号管稀释的标准液（Reagent J）到4号管，混匀

8．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent G）	标准液（Reagent J）	测定体系标准二氢溴化乙啶浓度
1	微升	微升	纳摩尔/升
2	微升	微升1号管	纳摩尔/升
3	微升	微升2号管	纳摩尔/升
4	微升	微升3号管	纳摩尔/升
5	微升	空对照	0

三、 标准曲线测定

1）二氢溴化乙啶标准曲线测定

1．移取XX微升缓冲液（Reagent G）到96孔板

2．加入25微升上述配制的标准液

3．轻轻摇动96孔板混匀

4．在室温下孵育5分钟，避免光照

5．即刻放进荧光酶标仪（激发波长370nm，散发波长420nm）检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

6．实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

7．构建反应前二氢溴化乙啶标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准二氢溴化乙啶浓度（纳摩尔/升）

2）二羟基溴化乙啶标准曲线测定

1．分别移取XX微升缓冲液（Reagent G）到96孔板

2．分别加入XX微升反应液（Reagent H）

3．分别加入25微升上述配制的标准液1至5

4．轻轻摇动96孔板混匀

5．在室温下孵育60分钟，避免光照

6．加入XX微升底物液（Reagent I）

7．轻轻摇动96孔板混匀

8．在室温下孵育5分钟，避免光照

9．即刻放进荧光酶标仪检测

（1）激发波长370nm，散发波长420nm：获得反应后二氢溴化乙啶相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

（2）激发波长540nm，散发波长590nm：获得二羟基溴化乙啶相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

11．实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

12．构建二羟基溴化乙啶标准曲线

（1）根据标准曲线获得标准样品反应后对应二氢溴化乙啶浓度（纳摩尔/升）

（2）计算标准二羟基溴化乙啶浓度：

反应前二氢溴化乙啶—反应后对应二氢溴化乙啶浓度

（3）构建二羟基溴化乙啶标准曲线（激发波长540nm，散发波长590nm）：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准二羟基溴化乙啶浓度（纳摩尔/升）

四、 样品测定

1．移取250微升上述制备的下层待测样品液相到96孔板里

2．加入XX微升底物液（Reagent I）

3．轻轻摇动96孔板混匀

4．在室温下孵育5分钟，避免光照

5．即刻放进荧光酶标仪检测（激发波长540nm，散发波长590nm）：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

6．实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

7．根据二羟基溴化乙啶标准曲线获得样品对应二羟基溴化乙啶浓度（纳摩尔/升）

五、 计算样品超氧阴离子实际浓度

（1）根据二羟基溴化乙啶标准曲线获得样品对应二羟基溴化乙啶浓度（纳摩尔/升）＝皮摩尔/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克

（2）根据二羟基溴化乙啶标准曲线获得样品对应二羟基溴化乙啶浓度（纳摩尔/升） XXX毫升＝皮摩尔XX毫克组织

（3）使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪直接检测（激发波长540nm，散发波长590nm）――RFU增高，表明超氧阴离子含量高

注意事项

1．本产品为20次操作

2．本产品可以检测纳摩尔级超氧阴离子或5毫克组织重量

3．操作时，须戴手套

4．孵育时，避免光照

5．系统操作过程中，标准曲线测定只需1次

6．碱性液（Reagent D）和萃取液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全

7．建议待测样本为5至50毫克组织

8．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品重量

9．建议样本处理完成后，即刻进行荧光分析

10．本公司同时提供系列超氧阴离子活性氧检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号名称规格

G&VS10185.2 组织超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒 20次

G&VS10185.2A 清理液（Reagent A） 100毫升

G&VS10185.2B 裂解液（Reagent B） 50毫升

G&VS10185.2C 染色液（Reagent C） 1毫升

G&VS10185.2D 碱性液（Reagent D） 1毫升

G&VS10185.2E 萃取液（Reagent E） 50毫升

G&VS10185.2F 中和液（Reagent F） 1毫升

G&VS10185.2G 缓冲液（Reagent G） 10毫升

G&VS10185.2H 反应液（Reagent H） 10毫升

G&VS10185.2I 底物液（Reagent I） 1毫升

G&VS10185.2J 标准液（Reagent J） 100微升

产品编号	名称	规格
G&VS10111.1	细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒	20次
G&VS10111.2	冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒	20次
G&VS10111.3	细胞培养液氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒	20次
G&VS10111.4	真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒	20次
G&VS10111.5	植物氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒	20次
G&VS10067.1	活体细胞氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂盒	100次
G&VS10067.2	冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂盒	50次
G&VS10067.3	细胞氧化应激活性氧超氧阴离子原位比色法定量检测试剂盒	100次
G&VS10067.4	细胞培养液氧化应激活性氧超氧阴离子比色法定量检测试剂盒	100次
G&VS10096.1	细胞超氧阴离子比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10096.2	组织超氧阴离子比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10096.3	血液超氧阴离子比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10096.4	体液超氧阴离子比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10184.1	细胞超氧阴离子化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10184.2	组织超氧阴离子化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10184.3	血液超氧阴离子化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10184.4	体液超氧阴离子化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.1	细胞超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.2	组织超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.3	血液超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.4	体液超氧阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.5	体内（in vivo）超氧化物阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.6	酵母超氧化物阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10185.7	植物超氧化物阴离子荧光法定量检测试剂盒	20次