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发布时间：2026/8/26 18:55:35 阅读次数：18
细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达比色法定量检测试剂是一种旨在运用抗PI3KI/P110β单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，通过染料四甲基联苯胺染色显示蓝色，即通过比色法定量评价PI3KI/P110β蛋白表达水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（人体、大鼠、小鼠等）的PI3KI/P110β蛋白表达水平分析。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
磷酸肌醇3激酶（Phosphoinositide 3-kinase；PI3K），又称为磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol -3-kinase），磷酸化磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol；PtdIns）上肌醇环（inositol ring）第三位置上的羟基。其分成三类：I类（EC2.7.1.153）磷酸肌醇3激酶通过磷酸化反应，将二磷酸肌醇（phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate；PI(4,5)P2；PIP2）转变成三磷酸肌醇（phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate；PI(3,4,5)P3；PIP3）。I类磷酸肌醇3激酶由异构双体组成：催化亚体为p110kD；调节亚体为p85kD或p101kD。其中催化亚体又分为α、β、γ、δ四种，而调节亚体分为p85α、p85β、p55γ、p150、p101、p87等六种；II类（EC2.7.1.154）和III类（EC2.7.1.137）磷酸肌醇3激酶的结构和功能有别于I类磷酸肌醇3激酶。磷酸肌醇3激酶的功能与细胞生长、繁殖、分化、运动、存活和胞内运输等有关。磷酸肌醇3激酶活性异常，尤其是PI3K/P110α，导致肿瘤发生。其下游蛋白包括PKB/AKT、PDK、GSK3β等。渥曼青霉素（wortmannin）和LY294002能够抑制磷酸肌醇3激酶活性。使用免疫组化方法，即运用抗PI3KI/P110β单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，通过生色底物染料四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）染色显示蓝色，来定量评价PI3KI/P110β蛋白表达水平。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
封阻液（Reagent C） 毫升
抗体液（Reagent D） 毫升
二抗液（Reagent E） 毫升
染色液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存固着液（Reagent B）、封阻液（Reagent C）、抗体液（Reagent D）、二抗液（Reagent E）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和二抗液（Reagent E）严禁反复冻融；染色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
用户自备
96孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个96孔细胞培养板的待测细胞（2 X 104细胞/孔）
2． 小心抽去细胞培养液
3． 加入xx微升清理液（Reagent B），铺满培养表面
4． 小心抽去清理液（Reagent B）
5． 加入xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent C）
6． 置于－20℃冰箱里孵育20分钟
7． 小心抽去固着液（Reagent C）
8． 空气中晾干
9． 加入xx微升清理液（Reagent B）
10． 室温下孵育2分钟
11． 小心抽去清理液（Reagent B）
12． 加入xx微升封阻液（Reagent D）
13． 置于37℃培养箱里孵育30分钟
14． 小心抽去封阻液（Reagent D）
15． 加入xx微升抗体液（Reagent E）
16． 置于37℃培养箱里孵育30分钟
17． 小心抽去抗体液（Reagent E）
18． 加入xx微升清理液（Reagent B）
19． 置于37℃培养箱里孵育5分钟
20． 小心抽去清理液（Reagent B）
21． 重复实验步18至20一次
22． 加入xx微升二抗液（Reagent F）
23． 置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照
24． 小心抽去二抗液（Reagent F）
25． 加入xx微升清理液（Reagent B）
26． 置于37℃培养箱里孵育5分钟
27． 小心抽去清理液（Reagent B）
28． 重复实验步25至27二次
29． 小心加入xx微升的染色液（Reagent G）
30． 室温下孵育30分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
31． 即刻放进酶标仪测读：波长650nm
32． 构建蛋白表达曲线：纵座标（Y轴）为蛋白表达吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等
注意事项
1． 本产品为10次操作量
2． 操作时，须戴手套
3． 细胞培养操作时，须严格无菌，以防污染
4． 孵育时，须避免光照
5． 染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
6． 如果染色过快或过深，建议稀释一抗和二抗浓度
7． 如果用户没有650nm的滤波器，可以使用630至650之间的任一波长
8． 建议细胞染色完成后，即刻进行比色分析
9． 本公司提供系列PI-3激酶检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10245.8 细胞PI3K/P110β蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10次
G&VS10245.8A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10245.8B 固着液（Reagent B） 毫升
G&VS10245.8C 封阻液（Reagent C） 毫升
G&VS10245.8D 抗体液（Reagent D） 毫升
G&VS10245.8E 二抗液（Reagent E） 毫升
G&VS10245.8F 染色液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10245.1 | 细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.2 | 载玻片细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.3 | 冰冻切片组织PI-3 KINASE/P110β蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.4 | 石蜡切片组织PI-3 KINASE/P110β蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.5 | 载玻片细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.6 | 冰冻切片组织PI-3 KINASE/P110β蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.7 | 石蜡切片组织PI-3 KINASE/P110β蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10245.8 | 细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达比色法定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10245.9 | 细胞PI-3 KINASE/P110β蛋白表达荧光定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10245.10 | PI-3 KINASE/P110β蛋白表达西方杂交分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10245.11 | PI-3 KINASE/P110β蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10245.12 | PI-3 KINASE/P110β蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 | 25次 |
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