当前位置:首页>技术专栏
发布时间:2026/8/27 9:50:43 阅读次数:32
体外微管蛋白(tubulin)结合分子(binding molecules)检测试剂盒产品说明书
主要用途
体外微管蛋白(tubulin)结合分子(binding molecules)检测试剂是一种旨在运用微管聚合体与目标蛋白的相互作用,通过高速离心沉淀,进而在SDS-PAGE电泳显示,来定性分析结合蛋白分子的亲和能力的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种细胞或组织裂解悬液、粗提或纯化微管相关蛋白的结合分析,以及抑制剂筛选。可以用于细胞分裂、运动、转运等的分子结构形态学研究,以及微管细胞骨架的蛋白分析。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感。
技术背景
微管(microtubules)是细胞骨架的成分之一,构成细胞浆中的基本结构网络,在有丝分裂、胞质分裂、囊泡转运方面具有重要作用。微管是微管蛋白(tubulin)的多聚体。微管蛋白分成5种亚型:α、β、γ、δ、ε。其中α和β微管蛋白(55Kd)形成异源二聚体,进而多重聚合成微管原纤维(proto-filaments)。微管由13个原纤维构成,直径为25纳米。每微米长微管由1650个异源二聚体组成。微管的装配、管束形成、和稳定取决于各种微管相关蛋白(microtubule associated protein;MAP)的活性和结合能力。基于微管聚合体与目标蛋白的相互作用,通过高速离心沉淀,进而在SDS-PAGE电泳显示,来定性分析结合蛋白分子的亲和能力,同时检测各种结合抑制剂等。
产品内容
反应液(Reagent A) 微升
稳定液(Reagent B) 微升
结合液(Reagent C) 微升
离心液(Reagent D) 毫升
标准液(Reagent E) 微升
阳性液(Reagent F) 微升
阴性液(Reagent G) 微升
产品说明书 1份
保存方式
标准液(Reagent E)保存在-70℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,严禁反复冻融;有效保证6月
用户自备
微管蛋白:用于结合蛋白以及抑制剂分析
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
微型超速离心管:用于样品离心的容器
培养箱:用于反应孵育
超速离心机:用于样品操作
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作:
1. 准备好待测的粗提或纯化蛋白样品以及微管蛋白样品,置于冰槽里待测
2. 准备3个1.5毫升离心管,分别标记为:待测样品管、阳性对照管和阴性对照管
3. 移取5微升用户自备的微管蛋白样品(100微克总量)到待测样品管
4. 分别移取xx微升标准液(Reagent E)到阳性对照管和阴性对照管里
5. 分别加入xx微升反应液(Reagent A)到所有管里,混匀
6. 放进37培养箱里孵育15分钟
7. 分别加入xx微升稳定液(Reagent B)到所有管里,混匀
8. 室温下,孵育15分钟
9. 加入5微升待测样品(总量3微克)到待测样品管
10. 加入xx微升阳性液(Reagent F)到阳性对照管里
11. 加入xx微升阴性液(Reagent G)到阴性对照管里
12. 分别加入xx微升结合液(Reagent C)到所有管里,混匀
13. 室温下,孵育30分钟
14. 移取xx微升离心液(Reagent D)到微型超速离心管里
15. 小心加入xx微升上述反应产物到离心液(Reagent D)的上面,避免震动
16. 放进4超速离心机离心30分钟,速度为100000 X g
17. 小心取出离心管,抽取上清液到新的1.5毫升离心管
18. (选择步骤)使用三氯醋酸浓缩上清液蛋白(建议使用三氯醋酸小量蛋白浓缩沉淀试剂盒-G&VS30001)
19. 进行后续常规煮沸后SDS-PAGE蛋白电泳或WESTERN BLOT
20. 结果分析
|
| 阴性液(Reagent G) +微管结合反应 | 阳性液(Reagent F) +微管结合反应 | 待测样品 +微管结合反应 | |||
| 电泳泳道 |
|
|
|
|
|
|
| 样品组分 |
|
|
|
|
|
|
| 检测蛋白条带 |
| ―― | ―― |
|
|
|
| 微管蛋白条带 | ―― |
| ―― |
|
|
|
| 结论 |
|
|
| |||
注意事项
1. 本产品为20次操作量
2. 试剂严禁反复冻融
3. 操作时,须戴手套
4. 用户需要另购微管蛋白
5. 标准液(Reagent E)源自于猪脑微管蛋白(tubulin),分子量55KD
6. 阴性液(Reagent G)源自于牛血清白蛋白(bovine serum protein;BSA),分子量66KD
7. 阳性液(Reagent F)源自于牛脑微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2;MAP2),分子量250KD
8. SDS-PAGE电泳根据蛋白分子量大小选择不同浓度;通常选择10%
9. 如果待测蛋白样品为裂解悬液,则需要做WESTERN BLOT
10. 如果检测抑制剂,则操作步骤中的待测样品改为抑制剂
11. 阴性液(Reagent G)结合反应后电泳参考图像
12. 阳性液(Reagent F)结合反应后电泳参考图像
13. 本公司提供系列细胞骨架检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 名称 规格
G&VS10274 体外微管蛋白结合分子检测试剂盒 20次
G&VS10274A 反应液(Reagent A) 1毫升
G&VS10274B 稳定液(Reagent B) 1毫升
G&VS10274C 结合液(Reagent C) 1毫升
G&VS10274D 离心液(Reagent D) 10毫升
G&VS10274E 标准液(Reagent E) 100微升
G&VS10274F 阳性液(Reagent F) 20微升
G&VS10274G 阴性液(Reagent G) 20微升
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10272 | 体外肌动蛋白(ACTIN)结合分子(binding molecules)检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10273 | 体外波形蛋白(Vimentin)结合分子(binding molecules)检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10274 | 体外微管蛋白(tubulin)结合分子(binding molecules)检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS12319 | 纯化微管蛋白(tubulin) | 1毫克/5毫克 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱:435399850@qq.com 电话:021-80186165 手机:16602115336
备案号:沪ICP备15046135号-7


