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发布时间：2026/8/27 9:53:23 阅读次数：31
组织氧化应激活性氧单线态氧气荧光定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
组织氧化应激活性氧单线态氧气荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针二氢罗丹明123，受到单线态氧气的作用，产生强力荧光的罗丹明123，由荧光分光光度仪分析，定量检测组织细胞内单线态氧气活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种新鲜的组织裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等），以及线粒体等细胞器的单线态氧气检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中单线态氧气（singlet oxygen；1 O2）是分子氧（O2）的抗磁形式或电激发形式。通过染料分子，例如孟加拉红（Rose Bengal）、亚甲基兰（Methylene Blue）、卟啉类化合物（Porphyrins）染料的光敏过程中能量转移产生，或过氧化氢和次氯酸的化学反应产生。单线态氧气可以调节紫外线A辐射的生物学作用、激活各种细胞信号通路等。单线态氧气会导致植物的光动力损伤（photodynamic damage）和动物心血管问题。基于二氢罗丹明123（dihydrorhodamine 123；DHR123）作为单线态氧气的选择性荧光探针，在单线态氧气的氧化作用下，产生强力荧光的分解产物罗丹明123 （rhodamine 123；RH），在荧光分光光度仪下（激发波长505nm，散发波长528nm），呈现荧光峰值的变化。据此定量检测组织细胞内单线态氧气活性氧族的浓度。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 微升
染色液（Reagent E） 微升
标准液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在-20℃冰箱里；染色液（Reagent E）和标准液（Reagent F）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织
（微型）台式离心机：用于样品操作
培养箱：用于反应孵育
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
9． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
10． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
11． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
12． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如组织裂解悬液等），置于冰槽里
2． 开启并设定好荧光分光光度仪（温度为25℃）：激发波长505nm，散发波长528nm，并置零
3． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化
三、 标准样品配制
1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent C）到每个离心管
3． 移取xx微升标准液（Reagent F）到1号管，混匀
4． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent F）到2号管，混匀
5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀
6． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀
7． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 缓冲液（Reagent C） | 标准液（Reagent F） | 测定体系 标准罗丹明浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | xx微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 空对照 | 0 |
四、标准曲线测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到比色皿或黑色96孔板孔里
2． 加入xx微升反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升染色液（Reagent E）
4． 加入10微升上述配制的标准液
5． 上下倾倒数次或摇动黑色96孔板，混匀
6． 在25℃温度下孵育30分钟，避免光照
7． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
8． 重复实验步骤1至7，测读完所有标准样品
9． 实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
10． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准罗丹明浓度（微摩尔/升）
五、样品测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到比色皿或黑色96孔板孔里
2． 加入xx微升反应液（Reagent D）
3． 加入xx微升染色液（Reagent E）
4． 加入10微升待测样品（50微克蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次或摇动黑色96孔板，混匀
6． 在25℃温度下孵育30分钟，避免光照
7． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
8． 实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
9． 根据标准曲线获得样品对应罗丹明浓度（微摩尔/升）
六、 计算样品实际活性
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 避免使用叠氮化钠处理样品
3． 操作时，须戴手套
4． 孵育时，避免光照
5． 样品须澄清，至关重要
6． 测定值由低到高变化
7． 荧光测定后，比色皿须清洗彻底
8． 建议待测样本蛋白浓度为50微克/10微升；如果样本浓度过低或过高， 则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
9． 如果使用线粒体，建议蛋白浓度为100微克/10微升
10． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
11． 可以使用单线态氧气抑制剂或清除剂（scavenger），即NaN3 和 DABCO 作为抑制剂对照或阴性对照
12． 可以使用单线态氧气激发剂（generator），即NDPO2（Endoperoxide of disodium - 3,3′-(1,4-naphthalene) bispropionate）等作为阳性对照
13． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10268.2 组织氧化应激活性氧单线态氧气荧光定量检测试剂盒 20次
G&VS10268.2A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10268.2B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10268.2C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS10268.2D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS10268.2E 染色液（Reagent E） 毫升
G&VS10268.2F 标准液（Reagent F） 微升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10150.1 | 细胞内氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10150.2 | 组织氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10150.3 | 体液氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10150.4 | 植物氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10150.5 | 单线态氧气清除（scavenging）活性比色法筛选试剂盒 | 20次 |
| G&VS10268.1 | 细胞内氧化应激活性氧（ROS）荧光定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10268.2 | 组织氧化应激活性氧（ROS）荧光定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10268.3 | 体液氧化应激活性氧（ROS）荧光定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10268.4 | 植物氧化应激活性氧（ROS）荧光定量检测试剂盒（单线态氧气） | 20次 |
| G&VS10268.5 | 单线态氧气清除（scavenging）活性荧光筛选试剂盒 | 20次 |
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