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发布时间:2026/8/27 9:58:24 阅读次数:60
动物神经组织细胞分离培养试剂盒产品说明书
主要用途
动物神经组织细胞分离培养试剂是一种旨在从动物活体脑和脊椎组织中分离出活力保证、高度纯化的原代神经细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种成年、幼年、产后(postnatal)、胎儿(fetus)和胚胎动物(小鼠、大鼠、牛、人等)中枢(皮质、海马、神经球祖细胞等)和脊椎神经组织细胞的制备。其制备产量高,活力保证,纯度可达90%。可以被用于神经元之间和神经细胞与基质之间相互作用的分析,以及药学、电生理学、发育、再生和神经毒性等的研究。产品即到即用,严格无菌、性能稳定,分离产量和纯度堪称同类产品最佳。
技术背景
脑组织中具有独特分明的层区,聚集着特定的神经细胞群,负责产后神经细胞的发育,精确协同作用于神经细胞的繁殖、分化和迁移等。胚胎和成年神经元对于压力因子的敏感性存在着巨大的差异,诸如对于谷氨酸水平、钙离子动力变化、线粒体功能等。通过木瓜蛋白酶(papain)的消化分离和等密度离心纯化获得神经元细胞,成为神经细胞体外研究和组织工程学研究的基本手段。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
酶解液(Reagent B) 毫升
中和液(Reagent C) 毫升
强化液(Reagent D) 毫升
离心液A(Reagent E) 毫升
离心液B(Reagent F) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存酶解液(Reagent B)、中和液(Reagent C)和强化液(Reagent D)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,离心液A和B(Reagent E和 F),避免光照;有效保证6月
用户自备
神经细胞培养液:用于纯化的神经细胞的后续培养
2升三角烧瓶:用于盛放麻醉动物的容器
乙醚:用于麻醉动物
手术器械:用于解剖动物
恒温水浴摇床:用于孵育反应
15毫升锥形离心管:用于细胞制备的容器
50毫升锥形离心管:用于细胞制备的容器
10毫升移液管:用于破碎组织
1毫升无菌塑料吸管:用于提取细胞
25cm2细胞培养瓶或35mm细胞培养皿或6孔细胞培养板:用于原代细胞培养的容器
4℃台式离心机:用于沉淀细胞
光学显微镜:用于观察细胞形态
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂置于冰槽里冻融,同时将用户自备的神经细胞培养液置于37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。
1. 准备1个2升三角烧瓶
2. 放入300至500克左右的大鼠
3. 注入2毫升乙醚,盖上
4. 观察大鼠,直至其四肢瘫软、背部肌肉松驰
5. 取出大鼠,局部消毒
6. 手术取出脑或脊椎神经等组织
7. 放进50毫升锥形离心管
8. 加入xx毫升清理液(Reagent A)清洗一次
9. 即刻用刀片轻柔切碎组织(0.5毫米大小)
10. 放进15毫升锥形离心管
11. 加入xx毫升酶解液(Reagent B)
12. 放进37℃恒温摇床孵育30分钟(注意:胚胎组织30分钟即可,成年组织90分钟,其它介于之间)
13. 使用10毫升移液管快速抽吸5次(注意:避免气泡)
14. 室温下静置5分钟
15. 小心移取上清液(不含组织颗粒)到新的15毫升锥形离心管
16. 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
17. 小心抽去上清液
18. 加入xx毫升清理液(Reagent A)
19. 加入xx微升中和液(Reagent C)
20. 加入xx微升强化液(Reagent D)
21. 混匀细胞颗粒群
22. 准备一个15毫升锥形离心管
23. 加入xx毫升离心液A(Reagent E)(注意:使用前,摇匀离心液A(Reagent E))
24. 轻轻加入xx毫升离心液B(Reagent F)在离心液A(Reagent E)的上面,避免震动(注意:使用前,摇匀离心液B(Reagent F))
25. 轻轻加入xx毫升细胞悬液在离心液B(Reagent F)的上面,避免震动
26. 放进台式离心机离心10分钟,速度为2000g(注意:使用零制动)
27. 小心取出离心管,可见离心液A和B交界面上的白色样品带(此为神经细胞)
28. 小心抽去样品带以上的液体
29. 小心收集样品带到15毫升锥形离心管(注意:用3毫升针筒和18号针头,置于样品带下缘小心缓慢抽吸)
30. 加入xx毫升清理液(Reagent A)
31. 放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为500g
32. 小心抽去上清液
33. 加入5毫升37℃预热的用户自备的神经细胞培养液,混匀细胞颗粒群
34. 转移到25cm2细胞培养瓶或35mm细胞培养皿或6孔细胞培养板的1孔
35. 放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育24至48小时或直至细胞贴壁
36. 更换一半培养液(注意:如果6小时已经贴壁,就可以更换一半培养液)
37. 以后,每间隔5天更换一半培养液一次,直至细胞生长铺满培养瓶或培养皿平面(注意:避免培养液颜色呈现黄色)
38. 光学显微镜观察:通常4天后出现神经突起;9天后的细胞呈现为典型神经细胞形态
注意事项
1. 本产品为10次操作
2. 本产品可用于分离各种神经细胞,例如少突胶质细胞(Oligodendroglia)、星型胶质细胞(astrocytes)、 锥体神经细胞(Pyramidal neurons)、下丘脑神经元、海马(Hippocampal)神经元、神经祖细胞(Neural progenitor cells)、大脑(Cerebral neurons)神经元、背根神经节神经元(Dorsal root ganglion neurons)、睫状神经节神经元(ciliary ganglion)、肠道神经元(enteric neurons)、视网膜神经元(retinal neurons)和坐骨神经(Sciatic nerves)等
3. 本产品适合胚胎或产后各种周龄的大、小鼠
4. 所有操作均须在无菌状态下进行
5. 本产品所获得的神经细胞纯度可达到90%
6. 本产品获得的细胞存活率可达70至95%不等
7. 本产品所获得的神经细胞产量为:1-2 X 106细胞/100毫克海马组织;1 X 107细胞/1克大脑皮质组织
8. 使用离心液A和B(Reagent E和F)前,须摇匀后加入;并注意避免污染母液
9. 分离的神经细胞活力检测建议使用细胞活力台盼蓝染色试剂盒-G&VS10009
10. 进一步单一神经细胞的克隆分离可以使用抗体或磁珠方法
11. 用户根据不同神经细胞种类,使用相应的神经细胞专性培养基,同时需要加入碱性成纤维细胞生长因子2(basic FGF2)或PDGFbb生长因子或胰岛素(insulin)或醋酸维生素A(retinyl acetate)等到细胞培养液中
12. 细胞培养瓶或培养皿需要经过多聚赖氨酸或层粘连蛋白(laminin)预处理,增加神经细胞的贴壁性,否则影响细胞成活和生长
13. 本公司提供系列细胞培养产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定分离的细胞维持正常活性
3. 本产品经鉴定分离的细胞纯度达90%
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10309 动物神经组织细胞分离培养试剂盒 10次
G&VS10309A 清理液(Reagent A) 毫升
G&VS10309B 酶解液(Reagent B) 毫升
G&VS10309C 中和液(Reagent C) 毫升
G&VS10309D 强化液(Reagent D) 毫升
G&VS10309E 离心液A(Reagent E) 毫升
G&VS10309F 离心液B(Reagent F) 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10068.1 | 动物肝星状细胞分离培养试剂盒 | 5次 |
| G&VS10068.2 | 动物肝细胞分离培养试剂盒 | 5次 |
| G&VS10291 | 动物新生心肌细胞分离培养试剂盒 | 5次 |
| G&VS10292 | 动物脂肪组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10293 | 动物肾上腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10294 | 动物骨组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10295 | 动物脑组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10296 | 动物软骨组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10297 | 动物直肠组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10298 | 动物内皮细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10299 | 动物上皮细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10300 | 动物眼组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10301 | 动物心脏组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10302 | 动物小肠组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10303 | 动物肾脏组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10304 | 动物肝组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10305 | 动物肺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10306 | 动物淋巴结组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10307 | 动物乳腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10308 | 动物肌肉组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10309 | 动物神经组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10310 | 动物胰腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10311 | 动物腮腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10312 | 动物垂体组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10313 | 动物前列腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10314 | 动物生殖组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10315 | 动物鳞片(Scales)组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10316 | 动物皮肤组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10317 | 动物脾脏组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10318 | 动物胸腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10319 | 动物甲状腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10320 | 动物扁桃腺组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10321 | 动物肿瘤组织细胞分离培养试剂盒 | 10次 |
| G&VS10341 | 人体NK细胞分离试剂盒 | 10次 |
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