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发布时间：2026/8/27 17:55:23 阅读次数：30
载玻片细胞胶原蛋白II（COLLAGEN II）蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
说明书
主要用途
载玻片细胞胶原蛋白II（COLLAGEN II）蛋白表达荧光显微镜检测试剂是一种旨在运用抗胶原蛋白II型单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过荧光显微镜分析胶原蛋白II型表达水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体等）的胶原蛋白II型分析。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
胶原蛋白（collagen）是一种纤维蛋白，存在于所有动物组织中，由纤维组织母细胞（fibroblast）合成，构成体内总蛋白含量的三分之一，是血管、心脏、肾脏、肝脏、皮肤、韧带、骨和软骨组织细胞外基质（extracellular matrix）的主要成分。胶原蛋白分子由三个多肽链组成，其中含有三种氨基酸：甘氨酸（glycine）、脯氨酸（proline）、羟脯氨酸（hydroxyproline）。胶原蛋白由29种类型，其中90%是细纤维形成填隙式胶原（I、II、III和V型）和基底膜胶原（IV型）。II型胶原蛋白主要构成50%软骨组织，也是眼睛玻璃状液（vitreous humour）的主要成分。其异常将导致胶原疾病（collagenopathy）等。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
封阻液（Reagent C） 毫升
抗体液（Reagent D） 毫升
染色液（Reagent E） 毫升
复染液（Reagent F） 毫升
抗淬灭液（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存固着液（Reagent B）、封阻液（Reagent C）、抗体液（Reagent D）、染色液（Reagent E）、复染液（Reagent F）和抗淬灭液（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和染色液（Reagent E）严禁反复冻融；染色液（Reagent E）、复染液（Reagent F）和抗淬灭液（Reagent G）避免光照；有效保证6月
用户自备
盖玻片：用于封片孵育
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
台式离心机：用于样品操作
培养箱：用于细胞染色孵育
荧光（共聚焦）显微镜：用于细胞荧光观察
实验步骤
方法一：载玻片贴壁细胞检测
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个载玻片的细胞样品
2． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满样品表面
3． 小心抽去清理液（Reagent A）
4． 加上xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent B）
5． 置于－20℃冰箱里孵育20分钟
6． 小心抽去固着液（Reagent B）
7． 空气中晾干
8． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
9． 室温下孵育2分钟
10． 小心抽去清理液（Reagent A）
11． 加上xx微升封阻液（Reagent C），铺满载玻片样品表面
12． 置于37℃培养箱里孵育30分钟，保持湿润
13． 小心抽去封阻液（Reagent C）
14． 加上xx微升抗体液（Reagent D），铺满载玻片样品表面
15． 盖上盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟（注意：避免气泡）
16． 小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent D）
17． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
18． 置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
19． 小心抽去清理液（Reagent A）
20． 重复实验步17至19二次
21． 加上xx微升染色液（Reagent E），铺满载玻片样品表面
22． 盖上新的盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照（注意：避免气泡）
23． 小心移去盖玻片，抽去染色液（Reagent E）
24． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
25． 置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
26． 小心抽去清理液（Reagent A）
27． 重复实验步24至26二次
28． 加上xx微升复染液（Reagent F），铺满载玻片样品表面
29． 室温下孵育3分钟，避免光照
30． 小心抽去复染液（Reagent F）
31． 加上xx微升抗淬灭液（Reagent G）
32． 盖上盖玻片或封片
33． 即刻在荧光显微镜下观察
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| 染色液（Reagent E） | 复染液（Reagent F） |
| 荧光染料 | 异硫氰酸荧光素（FITC） | 二咪基联苯基吲哚（DAPI） |
| 荧光颜色 |
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| 激发波长 |
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| 散发波长 |
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| 作用 |
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方法二：悬浮细胞涂片检测
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个60 mm细胞培养皿的细胞（2 X 106细胞）
2． 直至细胞铺满率达到50％
3． 小心抽去细胞培养液
4． 加入2毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
5． 放进37℃细胞培养箱孵育1分钟
6． 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
7． 移取细胞悬液到15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
8． 放进台式离心机离心10分钟，速度为400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
9． 小心抽去上清液
10． 加入xx毫升－20℃预冷的固着液（Reagent B），混匀细胞颗粒群
11． 放进台式离心机离心10分钟，速度为400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
12． 小心抽去固着液（Reagent B）
13． 重复实验步骤10至12一次
14． 加入xx微升固着液（Reagent B），混匀细胞颗粒群（注意：可以长期保存在－20℃冰箱里）
15． （选择步骤）细胞计数（使用固着液（Reagent B）调整细胞到1 X 107细胞/毫升）
16． 滴上10微升细胞悬液在载波片上，然后推片
17． 室温下静置10分钟，或直至空气中晾干载玻片 （注意：可以保存在70％酒精里，放进4℃冰箱长达数月）
18． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
19． 室温下孵育2分钟
20． 小心抽去清理液（Reagent A）
21． 加上xx微升封阻液（Reagent C），铺满载玻片样品表面
22． 置于37℃培养箱里孵育30分钟，保持湿润
23． 小心抽去封阻液（Reagent C）
24． 加上xx微升抗体液（Reagent D），铺满载玻片样品表面
25． 盖上盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟（注意：避免气泡）
26． 小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent D）
27． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
28． 置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
29． 小心抽去清理液（Reagent A）
30． 重复实验步27至29二次
31． 加上xx微升染色液（Reagent E），铺满载玻片样品表面
32． 盖上新的盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照（注意：避免气泡）
33． 小心移去盖玻片，抽去染色液（Reagent E）
34． 加上xx微升清理液（Reagent A），铺满载玻片样品表面
35． 置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
36． 小心抽去清理液（Reagent A）
37． 重复实验步34至36二次
38． 加上xx微升复染液（Reagent F），铺满载玻片样品表面
39． 室温下孵育3分钟，避免光照
40． 小心抽去复染液（Reagent F）
41． 加入xx微升抗淬灭液（Reagent G）
42． 盖上盖玻片或封片
43． 即刻在荧光显微镜下观察
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| 染色液（Reagent E） | 复染液（Reagent F） |
| 荧光染料 | 异硫氰酸荧光素（FITC） | 二咪基联苯基吲哚（DAPI） |
| 荧光颜色 |
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| 激发波长 |
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| 散发波长 |
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| 作用 |
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注意事项
1． 本产品为10次操作量
2． 在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3． 孵育时，须避免光照
4． 载玻片必须非常洁净，且要冷冻后使用
5． 建议细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过3天
6． 本公司提供系列细胞骨架检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 名称 规格
G&VS10344.2 载玻片细胞胶原蛋白II型表达荧光显微镜检测试剂盒 10次
G&VS10344.2A 清理液（Reagent A） 100毫升
G&VS10344.2B 固着液（Reagent B） 100毫升
G&VS10344.2C 封阻液（Reagent C） 50毫升
G&VS10344.2D 抗体液（Reagent D） 10毫升
G&VS10344.2E 染色液（Reagent E） 10毫升
G&VS10344.2F 复染液（Reagent F） 10毫升
G&VS10344.2G 抗淬灭液（Reagent G） 10毫升
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10344 .1 | 细胞COLLAGEN II蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .2 | 载玻片细胞COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .3 | 冰冻切片组织COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .4 | 石蜡切片组织COLLAGEN II蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .5 | 载玻片细胞βCOLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .6 | 冰冻切片组织COLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .7 | 石蜡切片组织COLLAGEN II蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 | 10/20次 |
| G&VS10344 .8 | 细胞COLLAGEN II蛋白表达比色法定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10344 .9 | 细胞COLLAGEN II蛋白表达荧光定量检测试剂盒 | 10/50 次 |
| G&VS10344.10 | COLLAGEN II蛋白表达西方杂交分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10344 .11 | COLLAGEN II蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 | 5次 |
| G&VS10344 .12 | COLLAGEN II蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 | 25次 |
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