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发布时间：2026/8/27 18:04:35 阅读次数：26
通用型线粒体DNA损伤AP位点比色法定量分析试剂盒产品说明书
主要用途
通用型线粒体DNA损伤AP位点比色法定量分析试剂是一种旨在使用醛基反应性探针结合样品中的AP位点上的醛基和辣根过氧化酶缀合卵白素的结合，由生色染料四甲基联苯胺参与反应，呈现黄色产物，即通过比色法定量评价线粒体样品DNA损伤水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体细胞或组织线粒体DNA样品AP位点的定量分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡、肿瘤等的研究。产品即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
核酸氧化损伤（nucleotide oxidative damage），包括DNA和RNA损伤，是由于环境因子或细胞代谢影响，在逃避细胞防御机制的前提下，所产生的四种损伤之一：氧化、烷化（alkylation）、水解和碱基错配损伤等。而氧化损伤主要通过活性氧族（reactive oxygen species；ROS），包括超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）等的作用，造成体细胞基因突变，影响细胞周期、基因转录、细胞凋亡等，最终导致各种疾病的发生，例如糖尿病、高血压、中风、癌症、衰老等。其中脱碱基位点（abasic site；AP），即无嘌呤（apurinic）和脱嘧啶（apyrimidinic）位点，在碱基切除和氧化、脱氨和烷基化碱基修复过程中产生的，是DNA氧化损伤中最普遍的损伤类型，高达每天产生5至20万个。AP位点损伤将抑制拓扑异构酶、复制、转录，以及致畸。由此AP位点成为化学性损害和细胞衰老的生物标记。基于醛基反应性探针（aldehyde reactive probe；ARP），与AP位点上开放形式的醛基反应，进而通过辣根过氧化酶缀合卵白素（Peroxidase conjugated avidin）的结合，由生色染料四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）参与反应，呈现黄色产物，在分光光度仪下（450nm波长）下，定量检测AP位点的含量。
产品内容
标准液A（Reagent A1） 微升
标准液B（Reagent A2） 微升
探针液（Reagent B） 微升
缓冲液（Reagent C） 毫升
强化液（Reagent D） 微升
浓缩液（Reagent E） 微升
沉淀液（Reagent F） 毫升
净化液（Reagent G） 毫升
结合液（Reagent H） 毫升
清理液（Reagent I） 毫升
酶促液（Reagent J） 毫升
底物液A（Reagent K） 毫升
底物液B（Reagent L） 毫升
终止液（Reagent M） 毫升
96孔孔板（DNA高度结合力） 4列（自备）
产品说明书 1份
保存方式
保存标准液（Reagent A）、探针液（Reagent B）和强化液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；浓缩液（Reagent E）、净化液（Reagent G）和底物液B（Reagent L）易挥发，密闭瓶盖；终止液（Reagent M）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
培养箱或恒温水槽：用于反应孵育
4℃（微型）台式离心机：用于样品操作
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃或4℃冰箱里试剂盒中的试剂置于室温下30分钟均衡温度。然后进行下列操作：
一、 标准样品管配制浓度表：
| 管号 | 标准液B（Reagent A2） | 标准液A（Reagent A1） | 缓冲液（Reagent C） | 标准AP位点含量 |
| 1 | 0 | xx微升 | xx微升 | 40位点/105碱基 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx微升 | 20位点/105碱基 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx微升 | 10位点/105碱基 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx微升 | 5位点/105碱基 |
| 5 | xx微升 | 0 | xx微升 | 0 |
二、 探针标记
1． 加入5微升待测线粒体DNA样品（注意：浓度为100微克/毫升）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升探针液（Reagent B），混匀
3． 放进37℃恒温水槽孵育1小时
4． 加入xx微升缓冲液（Reagent C）
5． 加入1微升强化液（Reagent D）
6． 枪头混匀
7． 加入xx微升浓缩液（Reagent E）
8． 加入xx微升沉淀液（Reagent F）
9． 涡旋震荡15秒
10． 放进—20℃冰箱里孵育30分钟
11． 放进4℃（微型）台式离心机离心20分钟，速度为16000g
12． 小心抽去上清液
13． 加入xx毫升净化液（Reagent G）
14． 放进4℃（微型）台式离心机离心20分钟，速度为16000g
15． 小心抽去上清液
16． 重复实验步骤13至15二次
17． 空气中挥干
18． 加入xx微升缓冲液（Reagent C），混悬
19． 置于冰槽里备用或放进—20℃冰箱里保存
三、 标准样品和待测样品测定
1． 准备1列用户自备的DNA高度结合力的孔板：标记好标准样品、待测线粒体DNA样品
2． 分别加入xx微升结合液（Reagent H）
3． 室温下，孵育16小时，避免光照
4． 小心抽去结合液
5． 分别加入200微升用户自备的无离子水
6． 分别抽去无离子水
7． 重复实验步骤5至6五次
8． 空气中彻底挥干（注意：可以暂时保存在暗室里，不超过2月）
9． 分别加入xx微升标准液A1至A5到对应的标准样品孔里
10． 分别加入50微升上述标记制备的待测样品到待测样品孔里
11． 室温下，孵育2小时至16小时，避免光照
12． 分别加入xx微升清理液（Reagent I）
13． 轻轻摇晃孔板10秒
14． 分别抽去清理液（注意：确保没有液体残留）
15． 重复实验步骤12至14四次
16． 分别加入xx微升酶促液（Reagent J）到所有孔里
17． 轻轻摇动孔板，充分混匀
18． 密封孔板
19． 放进37℃培养箱里孵育60分钟（注意：培养箱保持湿润，避免干化）
20． 小心抽去上清液
21． 分别加入xx微升清理液（Reagent I）
22． 轻轻摇晃孔板10秒
23． 小心抽去清理液（注意：确保没有液体残留）
24． 重复实验步骤21至23四次
25． 准备1个1.5毫升离心管
26． 分别加入等量的底物液A（Reagent K）和底物液B（Reagent L），混匀
27． 加入100微升上述配制的底物工作液到标准样品孔和待测样品孔里
28． 室温下孵育15分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
29． 加入xx微升终止液（Reagent M），混匀（注意：可见蓝色变成黄色）
30． 即刻放进酶标仪测读：450nm测定波长（注意：不宜超过15分钟）
31． 使用酶标仪软件，选择拟合数学模型，计算样品AP位点浓度（位点/105碱基）
注意事项
1． 本产品为20次操作量
2． 本产品检测敏感度达4至40AP位点/105碱基
3． 操作时，须戴手套
4． 系统操作时，标准样品测定只需一次
5． 孵育时，须避免光照
6． 浓缩液（Reagent E）、净化液（Reagent G）和底物液B（Reagent L）易挥发，密闭瓶盖；终止液（Reagent M）具有腐蚀性，注意操作安全
7． 加样时确保加入孔底，避免溅出和气泡
8． 注意加样时，避免交叉污染，避免污染母液
9． 建议使用湿度充分的培养箱
10． 用户根据实际用量，配制底物工作液；须新鲜配制，即刻使用
11． 建议染色完成后，即刻进行比色分析
12． 本公司提供系列线粒体DNA损伤检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10329 通用型线粒体DNA损伤AP位点比色法定量分析试剂盒 20次
G&VS10329A 标准液A（Reagent A1） 微升
G&VS10329B 标准液B（Reagent A2） 毫升
G&VS10329C 探针液（Reagent B） 毫升
G&VS10329D 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS10329E 强化液（Reagent D） 微升
G&VS10329F 浓缩液（Reagent E） 毫升
G&VS10329G 沉淀液（Reagent F） 毫升
G&VS10329H 净化液（Reagent G） 毫升
G&VS10329I 结合液（Reagent H） 毫升
G&VS10329J 清理液（Reagent I） 毫升
G&VS10329K 酶促液（Reagent J） 毫升
G&VS10329L 底物液A（Reagent K） 毫升
G&VS10329M 底物液B（Reagent L） 毫升
G&VS10329N 终止液（Reagent M） 毫升
G&VS10329O 96孔孔板（DNA高度结合力） 列
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS20128.1 | 通用型线粒体DNA片段常见缺失（CD4977）定性分析试剂盒 | 20次 |
| G&VS20128.2 | 通用型线粒体DNA片段常见缺失（CD4977）定量扩增分析试剂盒 | 20次 |
| G&VS20131 | 通用型线粒体DNA损伤超长延展定量PCR扩增分析试剂盒 | 20次 |
| G&VS10329 | 通用型线粒体DNA损伤AP位点比色法定量分析试剂盒 | 20次 |
| G&VS10330 | 通用型线粒体双链DNA断裂（DSB）免疫荧光分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10329 | 通用型线粒体DNA损伤（8-hydroxydeoxyguanosine）比色法定量检测 试剂盒 | 20次 |
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