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发布时间：2026/8/31 9:50:03 阅读次数：58
细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂是一种旨在通过蛋白质羰基与荧光探针荧光素-5-硫代氨基脲共价反应，产生蛋白质腙复合物后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中羰基含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）蛋白质羰基的含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
蛋白质氧化是由于活性氧直接诱导或氧化应激产物间接诱导产生蛋白质分子的共价修饰（covalent modification），其中包括体外氧化剂，以及衰老、疾病所致。氧化还原循环中的阳离子，例如亚铁离子或铜离子，可以与蛋白分子阳离子结合位点结合，一旦受到过氧化氢或氧分子的攻击，致使蛋白分子上脯氨酸（proline）、精氨酸（arginine）、赖氨酸（lysine）、苏氨酸（threonine）、组氨酸（histidine）转化为羰基衍生物（carbonyl derivatives）。羰基是由碳原子和氧原子双键构成的功能性基团。蛋白质羰基衍生物化学性能稳定，其羰基化含量成为最普遍的氧化应激活性氧的指标，更是蛋白质氧化的标志。基于荧光探针荧光素-5-硫代氨基脲（Fluoroscein-5-Thiosemicarbazide；FTC）与蛋白质氧化残基，例如半胱氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸等共价反应，产生荧光信号，在荧光分光光度仪或荧光酶标仪（激发波长485nm，散发波长535nm）检测，来定量测定羰基含量。其反应系统为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
去干扰液（Reagent C） 毫升
染色液（Reagent D） 微升
缓冲液（Reagent E） 毫升
沉淀液（Reagent F） 毫升
净化液（Reagent G） 毫升
处理液（Reagent H） 毫升
标准液（Reagent I） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存去干扰液（Reagent C）、染色液（Reagent D）和标准液（Reagent I）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D）和标准液（Reagent I）避免光照；沉淀液（Reagent F）和处理液（Reagent H）具有腐蚀性，注意操作安全；净化液（Reagent G）具有挥发性，注意密闭瓶盖；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织
微型台式离心机：用于萃取反应产物
涡旋震荡仪：用于混匀反应
黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用胰酶消化脱离细胞和中和处理
5． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
8． 小心抽去上清液
9． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
11． 放进DOUNCE匀浆器里匀浆80下
12． 将匀浆液转移到1.5毫升离心管
13． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为10000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取800微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 加入xx微升去干扰液（Reagent C），混匀
16． 室温下孵育15分钟
17． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为10000g
18． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
19． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
20． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作（注意：建议在1月之内完成检测）
二、 测定准备
1． 准备好上述待测样品，置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪：激发波长485nm，散发波长535nm，增益倍数50至100
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent E）到每个离心管
5． 移取xx微升标准液（Reagent I）到1号管，混匀
6． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent I）到2号管，混匀
7． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent I）到3号管，混匀
8． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent I）到4号管，混匀
9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 缓冲液（Reagent E） | 标准液（Reagent I） | 测定体系 标准FTC浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | 2微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | 1微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | 0.5微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | 0.25微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 空对照 | 空对照 |
三、 标准样品检测
1． 准备好1.5毫升离心管，标记为标准样品管
2． 分别加入xx微升上述配制的标准液（Reagent I）
3． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent E），混匀
4． 分别移取250微升到黑色96孔板的测试孔里
5． 即刻放进荧光酶标仪（激发波长485nm，散发波长535nm）检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
6． 实际荧光读数：标准样品读数—空对照读数
7． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准FTC浓度（微摩尔/升）
四、 待测样品检测
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent D）室温下融化，即刻移取25微升到1.5毫升离心管里，加入xx微升缓冲液（Reagent E），混匀，标记为染色工作液（1次操作量），置入冰槽里备用，避免光照。然后进行下列操作。
1． 准备好1.5毫升离心管，标记为待测样品管
2． 移取50微升待测样品（500微克蛋白总量）到相应管里
3． 分别加入50微升染色工作液到所有管里，混匀
4． 室温下孵育16小时，避免光照
5． 加入xx微升沉淀液（Reagent F）
6． 涡旋震荡5秒
7． 置于冰槽里孵育10分钟
8． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
9． 小心抽去上清液
10． 加入xx毫升净化液（Reagent G）
11． 涡旋震荡15秒
12． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心抽去上清液
14． 重复实验步骤10至13二次
15． 空气中挥干
16． 加入xx微升处理液（Reagent H）
17． 涡旋震荡15秒
18． 室温下孵育10分钟
19． 加入xx微升缓冲液（Reagent E）
20． 涡旋震荡15秒
21． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）
22． 移取250微升上清液到黑色96孔板的测试孔里
23． 即刻放进荧光酶标仪（激发波长485nm，散发波长535nm）检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
24． 实际荧光读数：待测样品读数—空对照读数
25． 根据标准曲线获得样品对应FTC浓度（微摩尔/升）
26． 计算样品含量
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准测定
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
4． 沉淀液（Reagent F）和处理液（Reagent H）具有腐蚀性，注意操作安全
5． 净化液（Reagent G）具有挥发性，注意密闭瓶盖
6． 建议待测样本蛋白浓度为5至10毫克/毫升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
7． 含量或浓度表述：纳摩尔/细胞量
8． 本公司提供系列氧化检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10372.1.1 细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 20次
G&VS10372.1.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10372.1.1B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10372.1.1C 去干扰液（Reagent C） 毫升
G&VS10372.1.1D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS10372.1.1E 缓冲液（Reagent E） 毫升
G&VS10372.1.1F 沉淀液（Reagent F） 毫升
G&VS10372.1.1G 净化液（Reagent G） 毫升
G&VS10372.1.1H 处理液（Reagent H） 毫升
G&VS10372.1.1I 标准液（Reagent I） 微升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10151.1.1 | 细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.2 | 组织内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.3 | 血液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.4 | 体液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.5 | 纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.1.6 | 植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10151.2 | 冰冻切片蛋白氧化（羰基化；carbonyl）免疫染色测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10372.1.1 | 细胞内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.2 | 组织内蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.3 | 血液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.4 | 体液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.5 | 纯化线粒体蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10372.1.6 | 植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）荧光检测试剂盒 | 20次 |
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