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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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植物高纯内质网分离试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/31 10:54:26 阅读次数：29

植物高纯内质网分离试剂盒产品说明书

主要用途

植物高纯内质网分离试剂是一种旨在通过机械或化学处理、差速和等密度离心方法，从植物组织中分离出活性完整而高度纯化的内质网细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其制备物产量高，活性保证，纯度可达99％。适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）、以及培养细胞的内质网的制备。可以被用于细胞色素P450系统外源化合物（xenobiotics）代谢、脂类代谢、内质网膜蛋白和腔内蛋白等研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量高。

技术背景

内质网（endoplasmic reticulum；ER）是真核生物的细胞器组分，构成细胞内小管（tubules）、囊泡（vesicles）和小池（cisternae/sac）相互连接的网络结构，负责蛋白转译、折叠和转运成为细胞膜成分（例如跨膜受体和其它整合膜蛋白等）或分泌型蛋白（例如消化性酶），负责钙离子区隔（sequestration），以及糖原、固醇类和其它大分子的生产和储存等功能。内质网分成三种：粗面内质网（Rough endoplasmic reticulum；RER）、滑面内质网（Smooth endoplasmic reticulum；SER）和肌质网（sarcoplasmic reticulum；SR）。根据细胞代谢的需要，粗面内质网和滑面内质网会互相转换。粗面内质网通过核糖体合成蛋白质并分类；滑面内质网进行固醇、碳水化合物和药物代谢等。肌质网的主要功能为储存和释放钙离子。内质网的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得内质网；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的内质网。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

净化液（Reagent C）毫升

活性液（Reagent D）微升

保存液（Reagent E）毫升

高纯液（Reagent F）毫升

分层液（Reagent G）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存净化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

6毫升超速离心管：用于超高速离心的容器

4℃台式离心机：用于样品制备

4℃超速离心机：用于样品制备

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

试管固定支架：用于离心管固定支撑

3号针筒和18号针头：用于收集样品

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）冻融，然后移出移取xx微升活性液（Reagent D）、 xx毫升净化液（Reagent C）到xx毫升的裂解液（Reagent B）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。

1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量

2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4．即刻用刀片切碎组织

5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6．加入预冷的5毫升裂解工作液

7．涡旋震荡5秒，充分混匀

8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆帮匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项9）

9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g

1．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管（如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核和未溶解的细胞以及完整质体等残渣

2．放进4℃超速离心机离心15分钟，速度为12000g

3．小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）

4．放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为100000g

5．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内质网组分

6．即刻加入xx微升保存液（Reagent E），充分混匀沉淀物

7．置于冰槽里备用

8．准备1个6毫升超速离心管

9．加入xx毫升高纯液（Reagent F）

10．小心沿着管壁，在高纯液（Reagent F）上面，一滴一滴加入xx毫升分层液（Reagent G）（注意：避免晃动）

11．小心沿着管壁，在分层液（Reagent G）上面，一滴一滴加入500微升上述内质网组分（注意：避免晃动）

12．小心放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为130000g

13．小心取出超速离心管：可见上端三分之一处（滑面内质网）和下端三分之一处（粗面内质网）棕色或乳黄色样品带

14．小心抽去滑面内质网样品带以上的液体

15．小心收集滑面内质网样品带到2毫升离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得高纯滑面内质网样品

16．进一步抽去粗面内质网样品带以上的液体

17．小心收集粗面内质网样品带到另一个2毫升离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得高纯粗面内质网样品

18．分别加入xx至xx毫升保存液（Reagent E）

19．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为100000g

20．小心抽去上清液

21．分别加入xx微升保存液（Reagent E），混匀

22．放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1．本产品为10次（1克植物组织）操作

2．操作时，须戴手套

3．操作时，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）

4．所有操作均须在4℃或以下状态进行

5．建议使用足够的样品量

6．建议严格控制操作时间

7．通常匀化次数为20至40下（或组织块状消失为止）达到80％的组织细胞裂解为理想状态，但不同的组织类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的组织细胞裂解程度：完整组织细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数

8．内质网沉淀颗粒非常松动，注意操作损失

9．通常1克组织的内质网含量为500至1000微克蛋白

10．本产品所获得的内质网纯度达95%以上

11．内质网的标志蛋白是NADPH细胞色素C还原酶（NADPH Cytochrome C Reductase）；建议使用组织NADPH细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒－G&VS50303.2

12．粗面内质网的标志是核糖体RNA（ribosome RNA）；建议使用 RNA荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒——G&VS20129

13．本公司提供系列亚细胞结构分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定分离的内质网维持正常活性

3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10370.3 植物高纯内质网分离试剂盒 10次

G&VS10370.3A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10370.3B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10370.3C 净化液（Reagent C）毫升

G&VS10370.3D 活性液（Reagent D）微升

G&VS10370.3E 保存液（Reagent E）毫升

G&VS10370.3F 高纯液（Reagent F）毫升

G&VS10370.3G 分层液（Reagent G）毫升

G&VS20129 RNA荧光（RiboGreen）定量检测试剂盒 20次

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10370.1	植物内质网（ER）粗提分离试剂盒	10次
G&VS10370.2	植物活性内质网（ER）分离试剂盒	10次
G&VS10370.3	植物高纯内质网（ER）分离试剂盒	10次
G&VS10041.1	通用型内质网形态染色试剂盒	100次
G&VS10041.2	内质网形态高质染色试剂盒	20次