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发布时间：2026/9/1 15:02:50 阅读次数：26
组织ADP/ATP比值生物发光法检测试剂盒产品说明书
主要用途
组织ADP/ATP比值生物发光法检测试剂是一种旨在通过萤火虫荧光素酶反应系统，荧光素在酶的催化下，与ATP发生反应，产生生物光能，采用冷光仪测定其相对冷光单位的变化，来定量分析丙酮酸激酶处理前后获得的组织样品（包括裂解或悬液）中ADP/ATP比值的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织（动物、人体）样品的ADP/ATP比值（ratio）检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。
技术背景
腺嘌呤核苷酸（adenine nucleotides），简称腺苷，包括单磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一种单体单位，为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）的组成成分，并提供化学能量，在能量代谢通路中维护诸如肌肉、胞膜等组织细胞结构的生化和生理功能，调节细胞糖酵解、三羧酸循环、电子传递系统、氧化磷酸化活动。腺嘌呤核苷酸在细胞中浓度低，且不稳定，通常通过其类型不同、浓度差异、分布状况，来评价细胞的代谢情况和能量状态。二磷酸腺苷（adenosine diphosphate；ADP），参与ADP-ATP循环，提供热能转换和动态平衡，尤其在线粒体需氧呼吸、光合成等实现。三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。ADP/ATP比值（ADP/ATP ratio）常用于区分细胞死亡与存活的方式：繁殖、凋亡、坏死。在细胞活力和药物发现研究中广泛运用。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是62 kd 的单体蛋白，催化ATP依赖性荧光素（luciferin）的氧化，经过电子转移，将化学能转化为氧化型荧光素（oxyluciferin）的光能，与ATP量成线性正相关。首先通过生物发光仪（560nm）检测，定量ATP浓度，而后在丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）的存在下，将ADP转化为ATP后，再次通过生物发光仪检测，以定量ADP浓度，最终获得ADP/ATP比值。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 微升
转化液（Reagent E） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证3月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
黑色96孔板：用于冷光检测操作的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
冷光仪：用于样品冷光检测
实验步骤
一、 待测样品准备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入置于冰槽里的xx微升裂解液（Reagent B）
9． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀
10． 放进冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
11． 即刻放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g
12． 小心移取上清液到新的无菌的1.5毫升离心管
13． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、 测定准备
1． 设置好冷光仪：温度25℃，1秒延时（Delay），1秒整合（Integration）检测。同时关上操作室的灯光
2． 测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的缓冲液（Reagent C）置入冰槽里融化，然后移出500微升到新的1.5毫升离心管，加入xx微升反应液（Reagent D），轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为反应工作液，放在暗室冰槽里备用。然后进行下列操作。
三、 活性测定
1． 准备1个黑色96孔板
2． 加入50微升待测样品
3． 加入xx微升反应工作液
4． 室温下（25℃）孵育3分钟，避免光照
5． 即刻放进冷光仪检测（1秒延时，1秒检测）：获得ATP相对发光单位（Relative Light Unit；RLU）
6． 室温下（25℃）静置10分钟，避免光照
7． 即刻放进冷光仪检测（1秒延时，1秒检测）：获得ADP背景相对发光单位（Relative Light Unit；RLU）
8． 加入xx微升转化液（Reagent E）
9． 室温下（25℃）孵育3分钟，避免光照
10． 即刻放进冷光仪检测（1秒延时，1秒检测）：获得ADP相对发光单位（Relative Light Unit；RLU）
11． 计算样品ADP/ATP比值
ADP/ATP比值=（ADP相对发光单位—ADP背景相对发光单位）÷ATP相对发光单位
12． 结果分析（参考）
| 细胞状态 | ADP水平 | ATP水平 | ADP/ATP比值 |
| 繁殖（proliferation） | 很低 | 高 | 很低（小于0.1） |
| 生长停滞（growth arrest） | 低 | 略高 | 低 |
| 凋亡（apoptosis） | 高 | 低 | 高（0.1至1.0） |
| 坏死（necrosis） | 很高 | 很低 | 很高（大于1.0） |
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 所有操作均须无菌状态下进行
3． 操作时，须戴手套
4． 建议每个样品安排3个孔，即重复3次，计算时取其平均值
5． 反应液（Reagent D）具有光高度敏感性，因此整个操作须避光进行，避免反复冻融
6． 由于ATP无处不在，且热稳定性。建议使用的枪头、用具须严格无菌，避免重复使用；操作时避免污染试剂溶液，不得用手触摸试剂容器的内盖
7． 如果用户没有冷光仪，可以使用闪烁探测器（scitillation counter 或β计数器）替代，但敏感性较低
8． 如果是注射式冷光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗冷光仪注射（injector）管道
9． 本公司提供系列ATP检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10400.2 组织ADP/ATP比值生物发光法检测试剂盒 50次
G&VS10400.2A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10400.2B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10400.2C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS10400.2D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS10400.2E 转化液（Reagent E） 微升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10400.1 | 细胞ADP/ATP比值生物发光法检测试剂盒 | 50次 |
| G&VS10400.2 | 组织ADP/ATP比值生物发光法检测试剂盒 | 50次 |
| G&VS10400.3 | 纯化线粒体ADP/ATP比值生物发光法检测试剂盒 | 50次 |
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