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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞 TUNEL 测定试剂盒产品说明书

发布时间：2023/11/9 14:28:48 阅读次数：137

主要用途

细胞 TUNEL 测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括固着、封阻、通透等完整步骤，从生长在切片上的新鲜培养细胞中探寻 DNA 断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)的帮助下，对 DNA 单链或双链上断点处的 3’末端进行标记，原位探测和定量分析单细胞水平的 DNA 降解状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、动物、植物等培养细胞的 DNA 降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞凋亡，或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中，起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活，将 DNA 链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA 断裂成小片断。在组织细胞原位 DNA 切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素 dUTP，即 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)，然后通过与过氧化物酶缀合卵白素(Peroxidase conjugated avidin) 的反应，由二氨基联苯胺(diaminobenzidine ，DAB)作用显示为棕色(过氧化物酶活性)。

保存封阻液(Reagent C)、酶标液(Reagent E)、染色液(Reagent F)和显色液 A(Reagent G) 在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在 4℃冰箱里；染色液(Reagent F)和显色液 A (Reagent G)，避免光照；有效保证 6 月

用户自备

小型染色缸：用于载玻片的清洗操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

甲基绿复染试剂盒(G&VS40010)：用于细胞染色后的复染

特别注意

1 ．酶标液(Reagent E) 不能在室温下冻融，而必须在冰槽里冻融，冻融后即刻使用；严禁反复冻融

2 ．显色液 A (Reagent G)和显色液 B (Reagent H) 必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉

3 ．显色液 A (Reagent G)如果出现沉淀，须过滤后再用

4 ．每次移取试剂，须更换枪头，以免污染母液，影响结果

5 ．每次操作必须做一个阳性对照

实验步骤

在染色前，将XXX℃冰箱里的试剂盒中显色液 A (Reagent G) 置入冰槽里融化，然后移取XXX微升显色液 A (Reagent G) 和XXX毫升显色液 B (Reagent H) 到XXX毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

一、细胞预处理

1 ．准备好待测的生长在载玻片上的培养细胞

2 ．小心抽去细胞培养液

3 ．小心加上XXX微升清理液(Reagent A) 在载玻片上，铺满细胞样品表面

4 ．小心移去载玻片上的清理液(Reagent A)

5 ．小心加上XXX微升固着液(Reagent B)，铺满整个样品表面

6 ．室温下孵育XXX分钟

7 ．小心移去载玻片上的固着液(Reagent B)

8 ．室温下，将载玻片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中，孵育XXX分钟

9 ．小心移去载玻片上的清理液(Reagent A)

10．小心加上XXX微升封阻液(Reagent C)，铺满整个样品表面

11．室温下孵育XXX分钟

12．室温下，将载玻片置入毫升清理液(Reagent A) 中，孵育XXX分钟

13．小心移去载玻片上的清理液(Reagent A)

14．小心加上XXX微升通透液(Reagent D)，铺满整个样品表面

15．置于冰槽里，孵育XXX分钟

16．室温下，将载玻片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中，孵育XXX分钟

17．小心移去载玻片上的清理液(Reagent A)

二、断点标记处理

18．小心加上XXX微升含有酶标液(Reagent E)，铺满整个切片样品表面

19．在XXX℃湿润的培养箱里，孵育XXX小时，保持湿润，避免干燥

20．小心移去切片上的酶标液(Reagent E)

21．室温下，小心将切片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中孵育XXX分钟

22．小心移去切片上的清理液(Reagent A)

三、样本染色处理

23．小心加上XXX微升染色液(Reagent F) 在切片上，铺满整个切片样品表面

24．室温下孵育XXX分钟，避免光照

25．小心移去切片上的染色液(Reagent F)

26．室温下，小心将切片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中孵育XXX分钟

27．小心移去切片上的清理液(Reagent A)

28．小心加上XXX微升含有显色液 A (Reagent G) 和显色液 B (Reagent H) 的显色工作液，铺满整个切片样品表面

29．室温下孵育XXX至XXX分钟，或直至样本出现棕褐色

30．小心移去切片上含有显色液A(Reagent G)和显色液B(Reagent H)的显色工作液

31．室温下，小心将切片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中浸泡XXX秒

32．小心移去切片上的清理液(Reagent A)

33．放上盖玻片或封片

34．(选择步骤)进行甲基绿复染(建议使用甲基绿复染试剂盒－G&VS40010)

35．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色

注意事项

1．本产品为 10 次操作

2．操作时，须戴手套

3．封阻液(Reagent C) 达到 100％封闭效果，超过双氧水封闭效果

4．本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度 1000 倍

5．本产品无需 POD 转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响

6．酶标液(Reagent E) 严禁反复冻融

7．清理液(Reagent A) 50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用

8．所有操作在室温下进行，除操作中规定之外

9．每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干：可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉

10．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

11．细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

12．本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

13．本公司提供 TUNEL 分析外包服务

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能长期稳定

2 ．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号	名称	规格
G&VS10022.1	细胞 TUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10022.1A	清理液(Reagent A)	500 毫升
G&VS10022.1B	固着液(Reagent B)	100 毫升
G&VS10022.1C	封阻液(Reagent C)	50 毫升
G&VS10022.1D	通透液(Reagent D)	50 毫升
G&VS10022.1E	酶标液(Reagent E)	5 毫升
G&VS10022.1F	染色液(Reagent F)	10 毫升
G&VS10022.1G	显色液 A(Reagent G)	10 毫升
G&VS10022.1H	显色液 B(Reagent H)	90 毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10016. 1	细胞内活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10016.2	细胞内活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒	100 次
G&VS10017	线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10021	细胞周期流式细胞分析试剂盒	100 次
G&VS10022. 1	细胞 TUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10022.2	冰冻切片 TUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10022.3	石蜡切片 TUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10063. 1	细胞 KUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10063.2	冰冻切片 KUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10063.3	石蜡切片 KUNEL 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10023. 1	HOECHST 33342 细胞核形态染色试剂盒	100 次
G&VS10023.2	PROPIDIUM IODIDE 细胞核形态染色试剂盒	100 次
G&VS10023.3	CHROMOMYCIN A3 细胞核形态染色试剂盒	50 次
G&VS10064	HOECHST 33342 和 PROPIDIUM IODIDE 细胞膜变检测试剂盒	50 次
G&VS10032	TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒	10 次
G&VS10042. 1	动物细胞/组织细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒	10 次
G&VS10042.2	植物细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒	10 次
G&VS20013	细胞调亡 DNA 条带检测试剂盒	10 次

G&VS10046	G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒	50 次
G&VS10051	ATP 细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒	100 次
G&VS10052	R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒	100 次
G&VS40010	甲基绿复染试剂盒	50 次