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发布时间：2026/9/1 15:11:10 阅读次数：33
活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒产品说明书
主要用途
活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明乙酯染料，选择性地聚集在活性线粒体内呈现荧光染色，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。
技术背景
四甲基罗丹明乙酯（tetramethylrhodamine ethyl ester；TMRE），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：第一，具有亲脂性和可逆性，且细胞低毒和光稳定； 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明乙酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，分布和结合在线粒体内膜上，呈现强烈荧光。线粒体膜电位的高低变化决定了TMRE的分布浓度。电位高，TMRE在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，TMRE弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位受到损害。 与TMRM染料相比，较为疏水或亲脂性。
产品内容
染色液（Reagent A） 微升
稀释液（Reagent B） 毫升
清理液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞脱落收集
1.5毫升离心管：用于活体细胞线粒体染色的容器
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于活体细胞线粒体荧光定性分析
比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体细胞线粒体荧光定量分析
细胞流式仪：用于活体细胞线粒体荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent B）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管，加入890微升稀释液（Reagent B），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
一、直接法
准备1个24孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约105细胞数）
小心抽去细胞培养液
轻轻沿着孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
小心抽去xx毫升 清理液（Reagent C）
加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀释液（Reagent B）的染色工作液，覆盖培养孔表面
放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）
小心抽去xx微升染色工作液
小心加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：检测前置于冰槽里）
即刻在倒置荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长549nm，散发波长575nm ）――可见
亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
二、间接法
准备1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）
小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）
加入xx毫升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
小心移出xx毫升 清理液（Reagent C）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）
加入500微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面
置入37℃培养箱1分种
轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入1毫升完全细胞培养液
移入15毫升锥形离心管
放进 台式离心机离心5分钟，速度为300g
小心抽去上清液
加入xx微升清理液（Reagent C）
用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管
加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀释液（Reagent B）的染色工作液
轻度涡旋震荡2秒
放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）
放进 台式微型离心机离心5分钟，速度为300g
小心抽去上清液
加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：检测前置于冰槽里）
选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察
混匀后，移出50微升在载玻片上
即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长549nm，散发波长575nm） ――可见亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
选择二、细胞流式仪分析
混匀后，即刻进行细胞流式仪分析：观察50000个细胞以上
| 激发波长 | 488nm |
| 匹配荧光染料 | 藻红蛋白（phycoerythrin；PE） |
| 荧光颜色 | 红色 |
| 散发波长 | 575 |
| 流式仪通道 | FL2 |
| 荧光增强 | 膜电位正常 |
选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
混匀后，移出100微升到黑色96孔板里或100微升比色皿里
即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（激发波长549nm，散发波长575nm），获得相对荧光单位（RFU）：RFU值高表明线粒体膜电位正常
注意事项
本产品为20次（0.5毫升工作液）操作
操作时，须戴手套
待测细胞建议不要过于饥饿或过度生长
避免使用固着液处理细胞
建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
孵育时，避免光照
健康细胞和线粒体呈现橘红色；死亡或凋亡细胞及损伤线粒体呈现黯淡或无荧光
本公司提供FCCP溶液，作为线粒体膜电位破坏分子，观察荧光显著减弱现象
参考图像
荧光显微镜：正常样品（蓝色为核染色）
2）细胞流式仪：上图为正常样品；下图为FCCP处理样品
本公司提供系列线粒体试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10392.2 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光测定试剂盒 20次
G&VS10392.2A 染色液（Reagent A） 微升
G&VS10392.2B 稀释液（Reagent B） 毫升
G&VS10392.2C 清理液（Reagent C） 毫升
G&VS12024 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液 毫升
G&VS12052 DMEM完全细胞培养液 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10006.1 | 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 | 10/50次 |
| G&VS10006.2 | 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 | 10/50次 |
| G&VS10006.3 | 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10013.1 | 纯化线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 100次 |
| G&VS10013.2 | 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10013.3 | 完全线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10013.4 | 活体组织线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10013.5 | 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10013.6 | 冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位（JC-1）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10391.1 | 纯化线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 100次 |
| G&VS10391.2 | 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10391.3 | 完全线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10391.4 | 活体组织线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10391.5 | 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10391.6 | 冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10392.1 | 纯化线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 100次 |
| G&VS10392.2 | 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10392.3 | 完全线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10392.4 | 活体组织线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 10次 |
| G&VS10392.5 | 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10392.6 | 冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒 | 20次 |
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