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发布时间:2026/9/2 8:06:37 阅读次数:26
高尔基体(Golgi apparatus)形态绿色荧光染色试剂盒产品说明书
主要用途
高尔基体(Golgi apparatus)形态绿色荧光染色试剂是一种旨在通过NBD标记的神经酰胺类荧光染料选择性地结合高尔基体膜,并呈现绿色,用于分析和观察高尔基体形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种高尔基体(动物、人体等)的形态观察和定位标记。产品严格无菌,即到即用,活体检测,分辨率高,操作简捷,性能稳定。
技术背景
高尔基体(Golgi apparatus或Golgi body),又称为高尔基复合体(Golgi complex),是大多数真核细胞的细胞器组分,由40至100扁平片层或称为小池(cisternae)堆叠成内膜系统(endomembrane system),分成正侧或内侧网络(cis-Golgi network)、近内中间网络(medial-Golgi)、内腔网络(endo-Golgi)、外侧或反侧网络等(trans-Golgi)细胞内小管(tubules)、囊泡(vesicles)和小池(cisternae/sac)相互连接的网络结构,其主要功能在于由内侧网络接受内质网囊泡中的蛋白质和脂类等生物大分子,处理(修饰、分类)和组装后,由外侧网络转运分泌到目标位置。同时也是合成蛋白聚糖(proteoglycan)和碳水化合物的重要场所。高尔基体荧光探针N-7(4-硝基苯2-恶-1,3-重氮)6-氨基己酰鞘氨醇(N-[7-(4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole)]-6-aminocaproyl sphingosine;C6-NBD-Ceramide),是一种荧光NBD(N-7(4-硝基苯2-恶-1,3-重氮;N-[7-(4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole)])标记的神经酰胺类似物(ceramide analog),选择性地结合高尔基体膜。它可以对活细胞进行直接染色,在激发波长466nm,散发波长536nm可以清晰看到被染成绿色的高尔基体细胞器。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
固着液(Reagent B) 毫升
预备液(Reagent C) 毫升
染色液(Reagent D) 微升
强化液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液(Reagent D)和强化液(Reagent E)在-20℃冰箱里;染色液(Reagent D)避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月
用户自备
24孔细胞培养板:用于贴壁细胞染色的容器
1.5毫升离心管:用于细胞染色的容器
微型台式离心机:用于沉淀细胞
4℃冰箱:用于染色孵育
培养箱:用于清洗孵育
(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent D)置入冰槽里融化,然后分别移出xx微升预备液(Reagent C)和2微升染色液(Reagent D)到新的1.5毫升离心管,标记为染色工作液,置于冰上,并放在暗室里备用。然后进行下列操作。
一、 贴壁细胞标准染色
1. 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞,细胞铺满率达70%
(注意:可以使用载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和其它培养孔板,见注意事项12)
2. 小心抽去细胞培养液
3. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
4. 小心抽去清理液
5. 小心加入xx微升含有预备液(Reagent C)和染色液(Reagent D)的染色工作液到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
6. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
7. 小心抽去染色工作液
8. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
9. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
10. 小心抽去清理液
11. 重复实验步骤8至10二次
12. 小心沿着孔壁加入xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
13. 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察:激发波长466nm,散发波长536nm(高尔基体呈现绿色)
二、 悬浮细胞或脱离细胞染色
1. 将悬浮细胞或脱离细胞(1 X 106细胞)移入到1.5毫升离心管
2. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
5. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
6. 小心抽去上清液
7. 加入xx微升含有预备液(Reagent C)和染色液(Reagent D)的染色工作液,混匀细胞颗粒群
8. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
9. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
10. 小心抽去上清液
11. 加入xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
12. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
13. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
14. 小心抽去上清液
15. 重复实验步骤11至14二次
16. 加入xx微升清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
17. 移出5微升到载玻片上,放上盖玻片
18. (选择步骤)如果需要双重染色,移出3.5微升染色细胞到载玻片上
19. (选择步骤)加入1微升用户需测的第二染料,放上盖玻片
20. (选择步骤)放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
21. 即刻在(共聚焦)荧光显微镜下进行观察:激发波长466nm,散发波长536nm(高尔基体呈现绿色)
四、细胞双重染色
1. 准备1个载玻片培养皿的待测细胞
2. 小心抽去细胞培养液
3. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖样品表面
4. 小心抽去清理液
5. 小心加上xx微升固着液(Reagent B),覆盖样品表面
6. 室温下孵育10分钟
7. 小心抽去固着液
8. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖样品表面
9. 小心抽去清理液
10. 重复实验步骤8至9二次
(注意:由此步骤开始,用户可以进行抗体荧光染色或膜不通透性荧光染料的通透和标记)
11. 小心加上100微升含有预备液(Reagent C)和染色液(Reagent D)的染色工作液,覆盖样品表面
12. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
13. 小心抽去染色工作液
14. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖样品表面
15. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
16. 小心抽去清理液
17. 重复实验步骤14至16二次
18. 小心加上xx微升4℃预冷的强化液(Reagent D),覆盖样品表面
14. 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察:激发波长466nm,散发波长536nm(高尔基体呈现绿色)
五、 细胞固定染色
1. 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞,细胞铺满率达70%
2. (注意:可以使用载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和其它培养孔板,见注意事项12)
3. 小心抽去细胞培养液
4. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
5. 小心抽去清理液
6. 小心沿着孔壁加入xx毫升固着液(Reagent B)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
7. 室温下孵育10分钟
8. 小心抽去固着液
9. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
10. 小心抽去清理液
11. 重复实验步骤9至10二次
12. 小心加上xx微升含有预备液(Reagent C)和染色液(Reagent D)的染色工作液到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
13. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
14. 小心抽去染色工作液
15. 小心沿着孔壁加入xx毫升4℃预冷的清理液(Reagent A)到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
16. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
17. 小心抽去清理液
18. 重复实验步骤15至17二次
19. 小心沿着孔壁加入xx微升4℃预冷的强化液(Reagent D),覆盖样品表面
20. 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察:激发波长466nm,散发波长536nm(高尔基体呈现绿色)
六、 切片染色
1. 准备1个待测的切片样品
2. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖切片表面
3. 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
4. 小心加入xx微升固着液(Reagent B),覆盖切片表面
5. 室温下孵育10分钟
6. 小心移去切片上的固着液(Reagent B)
7. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖切片表面
8. 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
9. 重复实验步骤7至8二次
10. 小心加上xx微升含有预备液(Reagent C)和染色液(Reagent D)的染色工作液,覆盖切片表面
11. 放进4℃冰箱里孵育30分钟
12. 小心移去切片上的染色工作液
13. 小心加上xx微升4℃预冷的清理液(Reagent A),覆盖切片表面
14. 放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
15. 小心抽去清理液
16. 重复实验步骤13至15二次
17. 小心加上xx微升4℃预冷的强化液(Reagent D),覆盖切片表面
18. 盖上盖玻片
19. 即刻在荧光显微镜下进行观察:激发波长466nm,散发波长536nm(高尔基体呈现绿色)
注意事项
1. 本产品为20次操作
2. 操作时,须戴手套
3. 孵育时,须避免光照
4. 剩余的染色工作液可放进-20℃储存备用
5. 本产品适合活体染色和固定染色,染色剂不易洗掉,染色持久
6. 根据不同细胞类型,可以调整染色工作液的使用剂量
7. 建议细胞染色完成后,即刻进行荧光检测分析
8. 细胞内胆固醇缺陷,其高尔基体染色荧光信号微弱
9. 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:
| 操作容器 | 建议操作体系 |
| 载玻片 | 100微升 |
| 载玻片培养皿 | 1毫升 |
| 35mm培养皿 | 1毫升 |
| 96孔培养板 | 100微升 |
| 48孔培养板 | 200微升 |
| 24孔培养板 | 500微升 |
| 12孔培养板 | 1毫升 |
| 6孔培养板 | 2毫升 |
| 25cm2细胞培养瓶 | 3毫升 |
10. 如果需要高强度高尔基体染色,建议使用高尔基体形态红色荧光染色试剂盒-G&VS10447.2
11. 本公司提供系列高尔基体分析试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10447.1 高尔基体形态绿色荧光染色试剂盒 50次
G&VS10447.1A 清理液(Reagent A) 毫升
G&VS10447.1B 固着液(Reagent B) 毫升
G&VS10447.1C 预备液(Reagent C) 毫升
G&VS10447.1D 染色液(Reagent D) 微升
G&VS10447.1D 强化液(Reagent E) 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10325.1 | 细胞/组织高尔基体(Golgi apparatus)粗提分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10325.2 | 细胞/组织活性高尔基体(Golgi apparatus)分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10325.3.1 | 细胞高质纯化高尔基体(Golgi apparatus)分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10325.3.2 | 组织高质纯化高尔基体(Golgi apparatus)分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10447.1 | 高尔基体(Golgi apparatus)形态绿色荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10447.2 | 高尔基体(Golgi apparatus)形态红色荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10326 | 分离高尔基体纯度双酶法(GT/NCR)检测试剂盒 | 20次 |
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