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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细菌ATP含量荧光定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/2 8:11:43 阅读次数：29

细菌ATP含量荧光定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

细菌ATP含量荧光定量检测试剂是一种旨在通过甘油激酶、甘油三磷酸氧化酶和过氧化酶酶连续反应系统中产生的过氧化氢，与非荧光性染料乙酰二氢氧吩恶嗪反应产生高度荧光的羟基异吩恶唑酮后荧光峰值的变化，来测定细菌样品中ATP含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解悬液样品中的ATP含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）是糖酵解通路中被转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）而产生乙醇所必须的辅助因子，是细胞生理学中能量代谢、脂肪酸代谢和糖代谢的重要因子。基于甘油和ATP，在甘油激酶（glycerol kinase）的催化下，磷酸化产生甘油-3-磷酸（glycerol-3-phosphate），再经甘油-3-磷酸氧化酶的作用，产生过氧化氢，进而通过过氧化酶（peroxidase）的催化，使非荧光性染料乙酰二氢氧吩恶嗪（10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine；ADHP）反应，生成高度荧光的羟基异吩恶唑酮（resorufin）后荧光峰值的变化（激发波长530nm，散发波长590nm），来定量测定ATP的含量。其反应系统为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

反应液（Reagent D）微升

底物液（Reagent E）毫升

标准液（Reagent F）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存标准液（Reagent F）在－70℃冰箱里；保存裂解液（Reagent B）、反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器

恒温培养箱：用于反应液孵育

微型台式离心机：用于样品制备

比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。反应液（Reagent D）避免光照。然后进行下列操作。

一、 样品准备

1．准备好待测细菌样品

2．进行细菌计数：在分光光度仪上测定OD600或直接计数

3．转移到预冷的1.5毫升离心管

4．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）

5．小心抽去上清液

6．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群

7．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）

8．小心抽去上清液

9．加入xx微升预冷的裂解液（Reagent B）

10．置于冰槽里孵育30分钟，期间每隔5分钟涡旋震荡5秒

11．放进4℃微型台式离心机离心20分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

12．小心移出上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

13．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

14．放进－70℃的冰箱里备用

15．或放进冰槽里，继续后续操作

二、 测定准备

1．准备好上述待测样品，置于冰槽里

2．设定好荧光分光光度仪或荧光酶标仪（温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，增益倍数100

3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

4．加入xx微升缓冲液（Reagent C）到1号管

5．分别加入xx微升缓冲液（Reagent C）到2至5号管

6．移取20微升标准液（Reagent F）到1号管，混匀

7．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent F）到2号管，混匀

8．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀

9．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀

10．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent C）	标准液（Reagent F）	测定体系标准ATP浓度
1	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
2	xx微升	xx微升1号管	xx微摩尔/升
3	xx微升	xx微升2号管	xx微摩尔/升
4	xx微升	xx微升3号管	xx纳摩尔/升
5	xx微升	0	0

三、标准样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入xx微升上述配制的标准液（Reagent F）

3．加入xx微升反应液（Reagent D）

4．加入xx微升底物液（Reagent E）

5．上下倾倒数次，混匀

6．在37℃温度下孵育30分钟

7．即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相对荧光读数

8．重复实验步骤1至7四次

9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准ATP浓度（微摩尔/升）

四、 样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入50微升待测样品（注意：50微克蛋白总量）

3．加入x微升反应液（Reagent D）

4．加入xx微升底物液（Reagent E）

5．上下倾倒数次，混匀

6．在37℃温度下孵育30分钟

7．即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相对荧光读数

8．根据标准曲线获得样品对应ATP浓度（微摩尔/升）

五、 计算样品活性

六、荧光酶标仪测定

1．在黑色96孔板上做好相应标记：标准样品和待测样品

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到相应孔里

3．分别加入50微升待测样品（50微克蛋白总量）或上述制备的标准液（Reagent F）

4．分别加入xx微升反应液（Reagent D）

5．分别加入xx微升底物液（Reagent E）

6．轻轻摇动黑色96孔板

7．在37℃温度下孵育30分钟

8．即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光读数

9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准ATP浓度（微摩尔/升）

10．根据标准曲线获得样品对应ATP浓度（微摩尔/升）

11．活性计算：

注意事项

1．本产品为50次操作，包括标准样品

2．操作时，须戴手套

3．建议样品保存在－70℃冰箱里

4．用户可以使用三氯醋酸法去蛋白处理

5．系统操作过程中，标准样品测定只需1次

6．测定值由低到高变化；测定可以持续30分钟

7．荧光测定后，比色皿须清洗彻底

8．样本测定60分钟读数高于0分钟读数表明具有ATP

9．建议待测样本蛋白浓度为50微克/50微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

10．如果用户没有匹配的荧光滤波器，可以使用530至570nm激发波长和590至600nm散发波长的任一波长替代

11．如果用户没有荧光分光仪，可以使用分光光度仪替代，波长为570nm

12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

13．本公司提供系列ATP检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS10435.5 细菌ATP含量荧光定量检测试剂盒 50次

G&VS10435.5A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10435.5B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10435.5C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS10435.5D 反应液（Reagent D）毫升

G&VS10435.5E 底物液（Reagent E）毫升

G&VS10435.5F 标准液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10435.1	通用型ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.2	细胞ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.3	组织ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.4	纯化线粒体ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.5	细菌ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.6	真菌/酵母ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.7	植物ATP含量荧光定量检测试剂盒	50次