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发布时间:2026/9/2 8:12:47 阅读次数:28
细胞脂质绿色荧光染色试剂盒产品说明书
主要用途
细胞脂质绿色荧光染色试剂是一种旨在通过使用荧光染料与脂类物质的特异结合并发出荧光检测信号,快速、敏感、可靠地活体定量测定各种培养细胞脂质含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种人体、动物等培养细胞的脂质活体染色和动态观察。用于成脂细胞定性、细胞病理学分析(脂质细胞瘤;LIPOID)等研究。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,荧光清晰。
技术背景
脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂,以及其它固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。BODIPY(4,4-difluoro-1,3,5,7-tetramethyl-4-bora-3a,4a-diaza- s-indacene)是一种亲脂性荧光染料,具有较高的油-水相位分配系数(partition coefficient),而容易快速穿过细胞膜,通过弥散-阱(diffusion-trap)机制,聚集在细胞浆的脂质体内,在激发波长450至490nm的激发下,显示强烈绿色荧光(散发波长500至530nm)。 BODIPY染色较之常用的尼罗红染色(9-diethylamino- 5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one;Nile red)具有四大优点:第一,BODIPY可以穿过各种细胞,包括具有胞壁的酵母或植物细胞等,而尼罗红具有胞壁差异;第二,BODIPY染色可以进行活细胞染色,而尼罗红会使细胞致死;第三,BODIPY染色具有脂质体(lipid body)特异性染色,而尼罗红会产生非特异性蛋白染色;第四,BODIPY可以和叶绿体的自发荧光产生显著区分。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
染色液(Reagent B) 微升
产品说明书
保存方式
保存染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent B)避免光照,有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
微型台式离心机:用于样品操作
荧光显微镜:用于观察阳性细胞
荧光分光光度仪:用于定量检测细胞脂质产量
实验步骤
方法一、荧光显微镜定性分析
一、悬浮细胞
1. 移取1毫升待测细胞(1 X 106细胞总量)到新的1.5毫升离心管
2. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为1000g
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx毫升缓冲液(Reagent A),充分混匀
5. 加入xx微升染色液(Reagent B),枪头抽吸混匀
6. 室温下孵育10分钟,避免光照
7. (选择步骤)放进微型台式离心机离心1分钟,速度为1000g
8. (选择步骤)小心抽去上清液
9. (选择步骤)加入xx毫升缓冲液(Reagent A),充分混匀
10. 移出10微升离心管中的细胞到载玻片上
11. 放上盖玻片
12. 在荧光显微镜(油镜)下,观察荧光细胞:激发波长490nm,散发波长515nm-显示强烈绿色荧光细胞的为脂质阳性细胞
二、贴壁细胞
1. 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞,细胞铺满率达70%
(注意:可以使用载玻片培养皿,35mm培养皿,和其它培养孔板,见注意事项11)
2. 小心抽去细胞培养液
3. 小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔,覆盖培养孔表面
4. 加入xx微升染色液(Reagent B)
5. 室温下孵育10分钟,避免光照
6. (选择步骤)小心抽去含有染色液(Reagent B)的细胞培养液
7. (选择步骤)加入1毫升新鲜的完全细胞培养液
8. 即刻在倒置荧光显微镜下,观察荧光细胞:激发波长490nm,散发波长515nm-显示强烈绿色荧光细胞的为脂质阳性细胞
方法二、荧光分光光度计定量分析
1. 将悬浮细胞或脱离贴壁细胞(1 X 106细胞总量)移入到1.5毫升离心管
2. 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为1000g
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx毫升缓冲液(Reagent A),充分混匀
5. 加入xx微升染色液(Reagent B),混匀
6. 室温下孵育10分钟,避免光照
7. (选择步骤)放进微型台式离心机离心1分钟,速度为1000g
8. (选择步骤)小心抽去上清液
9. (选择步骤)加入xx毫升缓冲液(Reagent A),充分混匀
10. 移入到1毫升比色皿
11. 放进荧光分光光度计测读:激发波长490nm,散发波长515nm
12. 确定脂质阳性细胞量和活体细胞脂质产量
注意事项
1. 本产品为20次(1毫升体系)操作
2. 操作时,须戴手套
3. 操作时,须无菌操作
4. 本产品可用于识别、定量、分离脂质阳性细胞以及动态观察脂质产量变化
5. BODIPY为通透性的染料,可以自由进入细胞
6. 荧光染色使用1:1000容量比:即1微升染色液(Reagent B)在1毫升细胞培养液里或缓冲液里
7. 根据细胞的差异,可以适当调整染料剂量,以增强或降低荧光强度
8. 培养基里避免使用脂类物质
9. 孵育时,必须避免光照
10. 建议染色完成后,即刻进行荧光检测分析
11. 荧光波长可以用激发波长450至490nm,散发波长500至530nm替代
12. 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:
| 操作容器 | 建议操作体系 |
| 载玻片培养皿 | 1毫升 |
| 35mm培养皿 | 1毫升 |
| 96孔培养板 | 100微升 |
| 48孔培养板 | 200微升 |
| 24孔培养板 | 500微升 |
| 12孔培养板 | 1毫升 |
| 6孔培养板 | 2毫升 |
| 25cm2细胞培养瓶 | 3毫升 |
13. 本公司提供系列脂质分析试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS10433 细胞脂质绿色荧光染色试剂盒 20次
G&VS10433A 清理液(Reagent A) 毫升
G&VS10433B 染色液(Reagent B) 微升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10107.1 | 细胞脂质生成比色法定量检测试剂盒 | 20/100次 |
| G&VS10107.2 | 地塞米松细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10107.3 | 异丁甲基黄嘌呤细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10107.4 | 胰岛素细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10108 | 细胞脂质溶解比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10109 | 二甲苯细胞脂质溶解定性染色检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10110.1 | 细胞脂质比色法定量检测试剂盒 | 20/100次 |
| G&VS10110.2 | 组织脂质比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10110.3 | 植物脂质比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10110.4 | 脂肪肝比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10433 | 细胞脂质绿色荧光染色试剂盒 | 20次 |
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