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土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)说明书

发布时间:2024/4/28 14:38:05      阅读次数:47

土壤 β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

测定原理:

S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;

试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

测定步骤:

试剂名称

测定管

对照管

风干土样(g)

0.05

0.05

试剂一(μL)

25

25

振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min

试剂二(μL)

400

 

试剂三(μL)

500

500

混匀, 37℃水浴 1h 后,立即 95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却

试剂二(μL)

 

400

充分混匀,10000g 25℃离心 10min,取上清液

上清液(μL)

500

500

试剂四(μL)

1000

1000

充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-β-GC 活力计算:

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。

单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-β-GC 活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T

=138.7×(ΔA+0.0027) 

T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:9.25×10 -4 L;W:样本质量,0.05g。


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