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发布时间：2024/4/28 14:38:05 阅读次数：16
土壤 β-葡萄糖苷酶（Solid-β-Glucosidase，S-β-GC）说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理：
S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
测定步骤：
| 试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
| 风干土样（g） | 0.05 | 0.05 |
| 试剂一（μL） | 25 | 25 |
| 振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min | ||
| 试剂二（μL） | 400 |
|
| 试剂三（μL） | 500 | 500 |
| 混匀， 37℃水浴 1h 后，立即 95℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却 | ||
| 试剂二（μL） |
| 400 |
| 充分混匀，10000g 25℃离心 10min，取上清液 | ||
| 上清液（μL） | 500 | 500 |
| 试剂四（μL） | 1000 | 1000 |
充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处蒸馏水调零，测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算：
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC 活力（μmol/d /g 土样）＝ (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T
=138.7×(ΔA+0.0027)
T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：9.25×10 -4 L；W：样本质量，0.05g。
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