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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞AMP含量光度法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/2 8:18:05 阅读次数：26

细胞AMP含量光度法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

细胞AMP含量光度法定量检测试剂是一种旨在通过肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析细胞裂解样品中AMP含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体细胞裂解悬液样品中AMP含量的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate；AMP），又称为5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylic acid），是一种在（脱氧）核糖核酸中发现的核苷酸。它是一种磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。分子式为C10H14N5O7P，分子量347。AMP可以通过腺苷酸激酶（adenylate kinase）催化2分子ADP生成，或通过ATP以及ADP水解产生。AMP常以腺苷-3',5'-环化一磷酸（cAMP）形式存在于细胞中。AMP与ATP之比反映细胞ATP生成状况以及脂肪酸氧化程度。基于底物AMP，在肌激酶（myokinase）的作用下，产生ADP后，通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其峰值的变化（340nm），来定量分析AMP的含量。其反应方式为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

底物液（Reagent D）毫升

反应液（Reagent E）微升

阴性液（Reagent F）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离

（微型）台式离心机：用于样品操作

200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析的容器

分光光度仪或酶标仪：用于光度分析

实验步骤

一、 样品准备

1．准备好25cm²细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 10⁶细胞）

2．小心抽去培养液（注意：如果检测细胞培养上清的AMP含量，则可以收集后按照下述测定步骤直接检测）

3．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面

4．小心抽去清理液

5．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）

6．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞

7．移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

8．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g

9．小心抽去上清液

10．加入xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀

11．转移到预冷的1.5毫升离心管

12．强力涡旋震荡15秒

13．置于冰槽里孵育30分钟

14．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

15．小心移取500微升上清液到新的无菌的1.5毫升离心管

16．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

17．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、 测定准备

1．开启并设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长340nm，并置零

2．从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化

3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

三、 背景对照测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入xx微升阴性液（Reagent F）

3．加入xx微升底物液（Reagent D）

4．上下倾倒数次，混匀

5．在30℃温度下孵育5分钟

6．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照0分钟读数

7．加入xx微升反应液（Reagent E）

8．上下倾倒数次，混匀

9．在30℃温度下孵育5分钟

10．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照5分钟读数

11．实际背景对照读数：0分钟读数—5分钟读数

四、 样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入10微升待测样品（50微克蛋白）（注意：样品须清澈）

3．加入xx微升底物液（Reagent D）

4．上下倾倒数次，混匀

5．在30℃温度下孵育5分钟

6．即刻放进分光光度仪检测，此为待测样品0分钟读数

7．加入xx微升反应液（Reagent E）

8．上下倾倒数次，混匀

9．在30℃温度下孵育5分钟

10．即刻放进分光光度仪检测，此为待测样品5分钟读数

11．实际待测样品读数：0分钟读数—5分钟读数

五、计算样品含量

六、酶标仪测定

1．在96孔孔板上做好相应标记：背景对照和样品

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到96孔板中的所有孔里

3．分别加入xx微升阴性液（Reagent F）或待测样品（50微克蛋白）到相应孔里（注意：样品须清澈）

4．分别加入xx微升底物液（Reagent D）

5．轻轻摇动96孔板

6．在30℃温度下孵育5分钟

7．即刻放进酶标仪检测，获得背景对照和待测样品0分钟读数

8．分别加入xx微升反应液（Reagent E）

9．轻轻摇动96孔板

10．在30℃温度下孵育5分钟

11．即刻放进酶标仪检测，获得背景对照和待测样品5分钟读数

12．实际读数：0分钟背景对照或待测样品读数—5分钟背景对照或待测样品读数

13．含量计算

注意事项

1．本产品为50次操作，包括背景对照

2．操作时，须戴手套

3．系统操作过程中，背景测定只需1次

4．建议使用比色皿测定

5．样品须澄清，至关重要

6．比色测定后，比色皿须清洗彻底

7．测定值由高到低变化，表明样品AMP阳性

8．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9．本公司提供系列核苷酸检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS10427.1 细胞AMP含量光度法定量检测试剂盒 50次

G&VS10427.1A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10427.1B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10427.1C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS10427.1D 反应液（Reagent D）毫升

G&VS10427.1E 底物液（Reagent E）毫升

G&VS10427.1F 阴性液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10427.1	细胞AMP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10427.2	组织AMP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10427.3	纯化线粒体AMP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10428.1	细胞AMP含量荧光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10428.2	组织AMP含量荧光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10428.3	纯化线粒体AMP含量荧光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10429.1	细胞AMP含量生物发光法检测试剂盒	50次
G&VS10429.2	组织AMP含量生物发光法检测试剂盒	50次
G&VS10429.3	纯化线粒体AMP含量生物发光法检测试剂盒	50次