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发布时间：2026/9/2 8:20:28 阅读次数：27
动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以氯苯胺红 -β-D- 吡喃半乳糖苷为棕黄色底物，水解所产生的暗红色的氯苯胺红，即采用比色法定量测定细胞裂解悬液制备样品中的低表达β-半乳糖苷酶活性，藉此评价作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来探测衰老状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞裂解悬液等样品衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。
技术背景
细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。氯苯胺红 -β-D- 吡喃半乳糖苷（chlorophenol red-β-D-galactopyranoside；CPRG），是一种棕黄色底物，以替代乳糖，十倍强于邻硝基苯基-β-D-半乳糖苷，在酸性条件下，受到内源性β-半乳糖苷酶的催化，水解成无色的半乳糖和暗红色的氯苯胺红，通过570nm波长的吸光值分析，来测定β-半乳糖苷酶的活性单位。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
稀释液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 毫升
终止液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液（Reagent D）在－70℃冰箱里，严格避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证2月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于样品操作
比色皿或96孔板：用于比色检测的容器
恒温水槽或培养箱：用于反应物孵育
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，开启分光光度仪预热，设置波长570nm；开启恒温水槽，设置温度为37℃。同时从－20℃冰箱里取出裂解液（Reagent B）和反应液（Reagent D）置于冰槽里融化；反应液（Reagent D）避免光照。然后进行下列操作：
一、 样品准备
1． 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 106细胞）
2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 活性检测
方法一：常规检测（比色皿）
1． 移取100微升上述制备的细胞裂解悬液样品到新的比色皿
2． 加入xx微升稀释液（Reagent C）
3． 上下倾倒数次，混匀
4． 放进37℃恒温水槽孵育5分钟
5． 加入xx微升反应液（Reagent D）（注意：使用前，充分混匀反应液（Reagent D）中可能的沉淀）
6． 上下倾倒数次，混匀
7． 放进37℃恒温水槽孵育至少30分钟，直至出现暗红色（注意：参见注意事项11和12）
8． 加入xx微升终止液（Reagent E）
9． 即刻放入分光光度仪检测，记录样品吸光读数，理想读数为0.1至1.2范围内
方法二：微量检测（96孔板）
1． 移取20微升上述制备的细胞裂解悬液样品到96孔板中的1个孔里
2． 加入xx微升稀释液（Reagent C）
3． 轻轻摇动96孔板数次，混匀
4． 放进37℃培养箱孵育5分钟
5． 加入xx微升反应液（Reagent D）（注意：使用前，充分混匀反应液（Reagent D）中可能的沉淀）
6． 轻轻摇动96孔板数次，混匀
7． 放进37℃培养箱孵育至少30分钟，直至出现暗红色（注意：参见注意事项11和12）
8． 加入xx微升终止液（Reagent E）
9． 即刻放入分光光度仪检测，记录样品吸光读数，理想读数为0.1至1.2范围内
三、 计算样品活性
计算一：按照操作步骤规定
计算二：基本公式
计算三：（微摩尔CPRG/分钟/毫升）换算成（微摩尔CPRG/分钟/毫克样品蛋白）
注意事项
1． 本产品为20次（比色皿）和80次（96孔板）操作
2． 本产品的各项参数达到最优化
3． 建议操作时，注意避光
4． 操作时，须戴手套
5． 反应液（Reagent D）严格避免光照和反复冻融
6． 用户可以根据需求按比例调整试剂用量进行样品制备
7． 用户可以测定细胞裂解悬液的蛋白浓度，便于计算活性单位之需；建议使用 Bradford蛋白质浓度定量检测试剂盒（G&VS30030.1）
8． 如果用户需要测定背景空对照，可以完全按照活性检测的操作步骤进行，唯一变化在于100微升样品改成100微升裂解液（Reagent B）替代
9． 如果用户测得背景空对照，计算活性时，勿忘（样品吸光读数－背景空对照读数）
10． 反应孵育时间的理想范围为10分钟至30分钟内出现暗红色显色：低于5分钟表明酶活性过高，建议稀释样品，否则影响检测精度
11． 如果样品的酶活性过低，可以增加孵育时间至72小时
12． 样品的酶活性吸光值在0.1至1.2 OD单位为理想状态，其酶活性与吸光值成线性正相关；吸光值在0.3至0.9 OD单位为完美状态
13． 反应终止后，即刻进行比色测定
14． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
15． 酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH6.0的条件下，每单位酶在单位时间内（每分钟）水解1微摩尔的氯苯胺红 -β-D- 吡喃半乳糖苷
16． 本公司提供系列β-半乳糖苷酶检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测高度敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10417.1 动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS10417.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10417.1B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10417.1C 稀释液（Reagent C） 毫升
G&VS10417.1D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS10417.1E 终止液（Reagent E） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10416.1 | 动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10416.2 | 动物组织衰老特异性β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10417.1 | 动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10417.2 | 动物组织衰老特异性β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒 | 20/100次 |
| G&VS10418.1 | 动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性超敏荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10418.2 | 动物组织衰老特异性β-半乳糖苷酶活性超敏荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10419.1 | 动物细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10419.2 | β-半乳糖苷酶标准曲线化学发光法测定试剂盒 | 20次 |
| G&VS10419.3 | 动物组织衰老特异性β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS30030.1 | Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 | 100次 |
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