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发布时间：2026/9/2 14:19:34 阅读次数：33
真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（过氧亚硝基阴离子peroxynitrite /ONOO-）
光度法（500nm）定量试剂盒产品说明书
主要用途
真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（过氧亚硝基阴离子peroxynitrite /ONOO-）光度法（500nm）定量试剂是一种旨在通过染色剂二氢罗丹明123，受到过氧亚硝基阴离子氧化后，呈现吸光峰值的变化，即采用光度法来定量检测真菌/酵母细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于一氧化氮代谢、细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢等的研究。其适用于各种实验用真菌/酵母菌株细胞内过氧亚硝基阴离子的分析。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中过氧亚硝基阴离子是由亚硝酸和过氧化氢反应或超氧阴离子与一氧化氮反应所产生，成为强力氧化剂和硝酸化剂，进而与细胞内的硫氢基（sulphydrils）、金属分子、二氧化碳、酪氨酸残基等目标分子反应，引起细胞，包括DNA和蛋白大分子的损伤等。作为过氧亚硝基阴离子的特异性探针二氢罗丹明123（dihydrorhodamine 123；DHR），是一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦受到过氧亚硝基阴离子的氧化，呈现吸光峰值（500nm波长）的变化，据此测定真菌/酵母细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧族的浓度。
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
强化液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 微升
稀释液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于工作液配制和样品操作的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
培养箱或恒温水槽：用于染色孵育
比色皿：用于光度分析的容器
分光光度仪：用于光度分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升）
2． 移入到预冷的15毫升锥形离心管
3． 置于冰槽里5分钟
4． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
7． 转移到预冷的1.5毫升离心管
8． 加入xx微升强化液（Reagent B）
9． 强力涡旋震荡15秒
10． 置于冰槽里1分钟
11． 重复实验步骤9至10五次
12． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
13． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长500nm，并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；染色液（Reagent C）避免光照
3． 实验开始前，移出xx微升染色液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent D)，混匀后，将染色工作液置入暗室里。然后进行下列操作。
三、 样品测定
1． 移取50微升上述制备的裂解悬液（样品：100微克蛋白）或xx微升稀释液（Reagent D）（背景对照）到1毫升比色杯里
2． 加入xx微升含有染色液（Reagent C）和稀释液（Reagent D）的染色工作液
3． 上下倾倒混匀
4． 放进37℃恒温水槽孵育20分钟，避免光照
5． 即刻放进分光光度仪检测（波长500nm）：获得吸光读数
四、计算样品浓度
注意事项
1． 本产品为20次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
4． 系统检测，背景对照只需1次
5． 染色工作液配制后1小时内使用为佳
6． 孵育时，须避免光照
7． 建议染色完成后，即刻进行光度分析
8． 吸光光读数越高，表明过氧亚硝基阴离子含量越高
9． 测定后，比色皿须清洗彻底
10． 建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升；如果样本过氧亚硝基阴离子含量过高或过低，则可以调整样本量
11． 本公司提供过氧亚硝基阴离子解构剂和清除剂溶液
12． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10472.3 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（过氧亚硝基阴离子）光度法定量试剂盒 20次
G&VS10472.3A 裂解液（Reagent A） 毫升
G&VS10472.3B 强化液（Reagent B） 毫升
G&VS10472.3C 染色液（Reagent C） 毫升
G&VS10472.3D 稀释液（Reagent D） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10472.1 | 细胞内氧化应激活性氧（ROS）光度法（500nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10472.2 | 活体组织氧化应激活性氧（ROS光度法（500nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10472.3 | 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）光度法（500nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10472.4 | 植物氧化应激活性氧（ROS）光度法（500nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10472.5 | 体液氧化应激活性氧（ROS）光度法（500nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10474.1 | 细胞内氧化应激活性氧（ROS）光度法（302nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10474.2 | 活体组织氧化应激活性氧（ROS光度法（302nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10474.3 | 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）光度法（302nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10474.4 | 植物氧化应激活性氧（ROS）光度法（302nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
| G&VS10474.5 | 体液氧化应激活性氧（ROS）光度法（302nm）定量试剂盒 （过氧亚硝基阴离子peroxynitrite） | 20次 |
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