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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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真菌/酵母高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/2 14:24:00 阅读次数：28

真菌/酵母高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书

主要用途

真菌/酵母高纯高尔基体分离试剂是一种旨在通过机械或化学处理、差速和等密度离心方法，从真菌/酵母细胞中分离出活性完整而高度纯化的高尔基细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其制备物产量高，活性保证，纯度可达99％。适合于各种新鲜培养或冻存的野生型或突变型真菌/酵母菌菌株细胞的高尔基体的制备。可以被用于受体循环、糖蛋白和脂蛋白合成，以及抗体释放机制等研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量高。

技术背景

高尔基体（Golgi apparatus或Golgi bodies），又称为高尔基复合体（Golgi complex），是一种细胞器，存在于大多数真核生物细胞中。高尔基体由扁平膜结合的高尔基堆（stacks），即小池（cisternae）组成，约有4至8层，分成3个功能区：顺面、中层、反面等，进一步地构成细胞膜、分泌泡、内涵体等。高尔基体整合各种大分子进行加工、分类和包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。高尔基体参与糖蛋白质的糖基化、碳水化合物的合成、蛋白质的分泌、膜转化、溶酶体形成的细胞活动。高尔基体的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得高尔基体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的高尔基体。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

平衡液（Reagent B）毫升

酶解液（Reagent C）微升

裂解液（Reagent D）毫升

净化液（Reagent E）毫升

活性液（Reagent F）微升

保存液（Reagent G）毫升

高纯液（Reagent H）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存酶解液（Reagent C）、净化液（Reagent E）和活性液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

6毫升超速离心管：用于超高速离心的容器

4℃台式离心机：用于样品制备

4℃超速离心机：用于样品制备

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

试管固定支架：用于离心管固定支撑

3号针筒和18号针头：用于收集样品

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent E）和活性液（Reagent F）冻融，然后移出移取xx微升活性液（Reagent F）、 xx毫升净化液（Reagent E）到xx毫升的裂解液（Reagent D）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。

1．准备好50毫升新鲜真菌/酵母菌样品

2．在分光光度仪上测OD600＝1.0（1 OD＝1 X 10⁷细胞/毫升；总量为5 X 10⁸细胞）或湿重1克

3．转移到预冷的50毫升锥形离心管

4．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

5．小心抽去上清液

6．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀

7．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

8．小心抽去上清液

9．加入xx毫升平衡液（Reagent B），混匀

10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

11．小心抽去上清液

12．加入xx毫升平衡液（Reagent B），混匀

13．加入xx微升酶解液（Reagent C），混匀

14．放进30℃恒温水槽孵育60分钟，期间每隔15分钟轻轻用手摇匀

15．加入xx毫升平衡液（Reagent B），混匀

16．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

17．小心抽去上清液

18．加入xx毫升平衡液（Reagent B），混匀

19．放进30℃恒温水槽孵育30分钟

20．同时将平衡液（Reagent B）置入冰槽里预冷30分钟（注意：以下步骤在4℃环境下进行）

21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

22．小心抽去上清液

23．加入xx毫升预冷的平衡液（Reagent B），混匀

24．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

25．小心抽去上清液

26．加入预冷的xx毫升裂解工作液

27．涡旋震荡5秒，充分混匀

28．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

29．在冰槽里用匀浆帮匀化细胞（约20至40下）（注意：参见注意事项7）

30．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管

31．（选择步骤）放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g

32．（选择步骤）小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

33．放进4℃超速离心机离心20分钟，速度为10000g

34．小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）

35．放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g

36．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得微粒体组分

37．即刻加入xx毫升保存液（Reagent G），充分混匀沉淀物

38．加入xx毫升高纯液（Reagent H），混匀

39．放进4℃超速离心机离心2小时30分钟，速度为365000g

40．小心取出超速离心管：可见顶端和中端处（高尔基体样品带）和底端处（内质网样品带）

41．小心收集顶端和中端处高尔基体样品带到2毫升离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得高纯高尔基体样品

42．加入xx至xx毫升保存液（Reagent G）

43．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为100000g

44．小心抽去上清液

45．加入xx毫升保存液（Reagent G），混匀

46．放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1．本产品为10次（5 X 10⁸细胞）操作

2．操作时，须戴手套

3．操作时，避免污染母液，尤其是平衡液（Reagent B）、裂解液（Reagent D）和保存液（Reagent G）

4．所有操作均须在4℃或以下状态进行

5．建议使用足够的样品量

6．建议严格控制操作时间

7．通常匀化次数为20至40下（或细胞颗粒块消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数

8．通常5 X 10⁷细胞的高尔基体含量为15微克蛋白

9．本产品所获得的高尔基体纯度达95%以上

10．高尔基体的标志蛋白是UDP半乳糖基转移酶（UDP-galactosyl transferase）；建议使用纯化高尔基体UDP半乳糖基转移酶活性比色法定量检测试剂盒－G&VS50414.3

11．本公司提供系列亚细胞结构分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定分离的高尔基体维持正常活性

3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10473.3 真菌/酵母高纯高尔基体分离试剂盒 10次

G&VS10473.3A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10473.3B 平衡液（Reagent B）毫升

G&VS10473.3C 酶解液（Reagent C）毫升

G&VS10473.3D 裂解液（Reagent D）毫升

G&VS10473.3E 净化液（Reagent E）毫升

G&VS10473.3F 活性液（Reagent F）微升

G&VS10473.3G 保存液（Reagent G）毫升

G&VS10473.3H 高纯液（Reagent H）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10473.1	真菌/酵母高尔基体（Golgi apparatus）粗提分离试剂盒	10次
G&VS10473.2	真菌/酵母活性高尔基体（Golgi apparatus）分离试剂盒	10次
G&VS10473.3	真菌/酵母高质纯化高尔基体（Golgi apparatus）分离试剂盒	10次
G&VS10447.1	高尔基体（Golgi apparatus）形态绿色荧光染色试剂盒	20次
G&VS10447.2	高尔基体（Golgi apparatus）形态红色荧光染色试剂盒	20次
G&VS50414.1	细胞UDP半乳糖转移酶（UDP-glactosyl transferase）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50414.2	组织UDP半乳糖转移酶（UDP-glactosyl transferase）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS50414.3	纯化高尔基体UDP半乳糖转移酶（UDP-glactosyl transferase）活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10326	分离高尔基体纯度双酶法（GT/NCR）检测试剂盒	20次