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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞ATP含量光度法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/2 14:26:40 阅读次数：33

细胞ATP含量光度法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

细胞ATP含量光度法定量检测试剂是一种旨在通过3-磷酸甘油磷酸激酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶酶偶联反应系统中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（NADH）氧化后峰值的降低，即采用光度法来测定样品中ATP含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等）中ATP的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）是糖酵解通路中被转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）而产生乙醇所必须的辅助因子，是细胞生理学中能量代谢、脂肪酸代谢和糖代谢的重要因子。基于底物ATP在磷酸甘油激酶（phosphoglycerate kinase）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）酶偶联反应系统中，产生3-磷酸甘油醛（Glyceraldehyde-3-Phosphate；G-3-P），同时其辅酶因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；β-NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；β-NAD），通过测定吸光值的变化（340nm 波长），来定量分析ATP的浓度。其反应方式为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

反应液（Reagent D）毫升

底物液（Reagent E）毫升

酶促液（Reagent F）毫升

阴性液（Reagent G）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）、缓冲液（Reagent C）、反应液（Reagent D）、底物液（Reagent E）和酶促液（Reagent F）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

细胞刮脱棒：用于细胞脱离

（微型）台式离心机：用于样品操作

比色皿或96孔板：用于光度分析的容器

分光光度仪或酶标仪：用于光度分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的缓冲液（Reagent C）、反应液（Reagent D）、底物液（Reagent E）和酶促液（Reagent F）置入冰槽里融化；反应液（Reagent D）避免光照。然后进行下列操作。

一、 待测样品准备

1．准备好75cm²细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 10⁷细胞）

2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面

3．小心抽去清理液

4．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）

5．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞

6．移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

7．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g

8．小心抽去上清液

9．加入xx至xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀

10．转移到预冷的1.5毫升离心管

11．强力涡旋震荡15秒

12．置于冰槽里孵育30分钟

13．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

14．小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

15．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

16．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、 测定准备

1．准备好待测ATP的样品（例如细胞裂解悬液样品等），置于冰槽里

2．设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长340nm，0分钟和5分钟各读一次

3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

三、 背景对照测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入xx微升反应液（Reagent D）

3．加入xx微升底物液（Reagent E）

4．加入xx微升酶促液（Reagent F）

5．置于37℃温度下孵育3分钟，避免光照

6．加入xx微升阴性液（Reagent G）

7．上下倾倒数次，混匀

8．即刻放进分光光度仪检测，，获得0分钟和5分钟读数

9．背景实际读数：0分钟读数－5分钟读数

四、 样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2．加入xx微升反应液（Reagent D）

3．加入xx微升底物液（Reagent E）

4．加入xx微升酶促液（Reagent F）

5．置于37℃温度下孵育3分钟，避免光照

6．加入25微升（100微克蛋白）待测样品（注意：样品须清澈）

7．上下倾倒数次，混匀

8．即刻放进分光光度仪检测，获得0分钟和5分钟读数

9．样品实际读数：0分钟读数－5分钟读数

五、计算样品浓度

六、酶标仪测定

1．在96孔板上做好相应标记：背景对照和待测样品

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到所有孔里

3．分别加入xx微升反应液（Reagent D）到所有孔里

4．分别加入xx微升底物液（Reagent E）

5．分别加入xx微升酶促液（Reagent F）到所有孔里

6．置于37℃温度下孵育3分钟，避免光照

7．分别加入xx微升阴性液（Reagent G）和待测样品（100微克蛋白）到对应孔里

8．轻轻摇动96孔板，混匀

9．即刻放进酶标仪检测，获得背景和待测样品0分钟和5分钟读数

10．实际读数：0分钟读数－5分钟读数

11．浓度计算

注意事项

1．本产品为50次操作，包括背景对照

2．操作时，须戴手套

3．系统操作过程中，背景测定只需1次

4．样品须澄清，至关重要

5．孵育时，避免光照

6．加样后即刻光度测定

7．测定值由高到低变化；测定持续5分钟（终点测定）

8．光度测定后，比色皿须清洗彻底

9．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

10．本公司提供系列生化检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS10475.1 细胞ATP含量光度法定量检测试剂盒 50次

G&VS10475.1A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10475.1B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10475.1C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS10475.1D 反应液（Reagent D）毫升

G&VS10475.1E 底物液（Reagent E）毫升

G&VS10475.1F 酶促液（Reagent F）毫升

G&VS10475.1G 阴性液（Reagent G）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10050.1	细胞ATP生物发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10050.2	组织ATP生物发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10050.3	纯化线粒体ATP生物发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10475.1	细胞ATP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10475.2	组织ATP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10475.3	纯化线粒体ATP含量光度法定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.1	通用型ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.2	细胞ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.3	组织ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.4	纯化线粒体ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.5	细菌ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.6	真菌/酵母ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10435.7	植物ATP荧光定量检测试剂盒	50次
G&VS10478	ATP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次