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革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒产品说明书

发布时间:2024/4/28 14:42:23      阅读次数:42

主要用途

革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂是一种旨在使用速离心,分离并收集所有细胞外膜囊泡的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌外膜囊泡及其蛋白的纯化。产品即到即用,性能稳定,操作便捷,萃取产量和纯度皆佳。

技术背景

外膜囊泡(outer membrane vesicleOMV)为含有周质内容物(包括外膜蛋白、DNARNA、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等)的球形电子致密芽状体(spherical bud),细胞外间隔体,双层磷脂,20200纳米大小,来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物,使之与环境或宿主细胞进行反应,并调解各种功能,包括促进病理形成,调节细菌互动,转运各种信号分子(例如DNARNA、蛋白质、内毒素、毒力因子等),保护细菌生存、结合和侵入,引起毒性,产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡10倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂,获得高纯外膜囊泡,充分保留蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容

保存液Reagent A       毫升

溶解液(Reagent B       毫升

活性液(Reagent C       微升

产品说明书            1 

保存方式

保存活性液(Reagent C)在-20℃冰箱里其余的保存在4℃冰箱里有效保证6

用户自备

50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于样品保存的容器

分光光度仪:用于测定细菌浓度

台式离心机:用于样品操作

超速离心机:用于样品操作

恒温摇床:用于培养细菌细胞

0.45微米滤膜:用于样品操作

真空浓缩装置:用于样品操作

实验步骤

实验开始前,将试剂盒里的活性液(Reagent C从-20的冰箱里取出,置入冰槽里冻融,然后移出xx毫升解液(Reagent B1.5毫升离心管,加入xx微升活性液(Reagent C,充分混匀,置于冰槽里,标记为解工作液然后进行下列操作。

1. 准备好1毫升过夜培养的新鲜细菌样品

2. 移取500微升到50毫升细菌培养液(注意:用户可以进行诱导培养,例如无铁培养等)

3. 放进37恒温摇床孵育过夜,速度为200RPM

4. 在分光光度仪上测OD60011 OD1 X 109细胞/毫升;总量为5 X 1010细胞) 

5. 转移到预冷的50毫升锥形离心管

6. 放进4℃台式离心机离心30分钟,速度为5000g

7. 小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管

8. 重复实验步骤67一次

9. 使用0.45微米滤膜真空过滤一次

10. (选择步骤)使用100kD蛋白临界点浓缩处理(例如Millipore centriplus YM100

11. 放进4超速离心机离心3小时,速度为150000g

12. 小心抽去上清液

13. 加入xx预冷的保存液(Reagent A

14. 或加入xx微升预冷的含有解液(Reagent B活性液(Reagent C解工作液

15. 用枪头上下抽吸,充分混匀

16. 转移到新的预冷的1.5毫升离心管

17. 即刻放进-70冰箱里保存或置于里备用

18. 进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

注意事项

1. 本产品为20次(50毫升菌液)操作

2. 所有操作须4℃状态下进行

3. 建议使用新鲜细菌接种,培养到指数生长阶段为理想状态

4. 溶解液(Reagent B)为淡乳白色

5. 活性液Reagent C避免反复冻融

6. 本产品按照50毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量,可相应调整试剂用量

7. 根据菌种不同,50毫升(OD6001)菌液可获得5100微克外膜囊泡蛋白

8. 制备产物如果放在-70冰箱里储存备用,严格避免反复冻融

9. 本公司提供系列细菌试剂产品
  

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

订购信息 

单组份订购信息

编号           名称                                                        规格

G&VS30022.5     革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒     20

G&VS30022.5A    保存液(Reagent A                                         毫升

G&VS30022.5B    溶解液(Reagent B)              毫升

G&VS30022.5C    活性液(Reagent C             微升

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS30022.1

细菌可溶性总蛋白制备试剂盒

20

G&VS30022.2

细菌可溶性膜蛋白制备试剂盒

20

G&VS30022.3

革兰氏阴性细菌外膜蛋白制备试剂盒

20

G&VS30022.4

革兰氏阴性细菌内膜蛋白制备试剂盒

20

G&VS30022.5

革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒

20

G&VS30022.6

革兰氏阴性细菌外膜囊泡高纯制备试剂盒

20

G&VS10547

革兰氏阴性细菌外膜囊泡荧光(FM4-64)定量检测试剂盒

20

G&VS10548

革兰氏阴性细菌外膜囊泡比色法定量检测试剂盒

20

G&VS10549

革兰氏阴性细菌外膜囊泡光度法(PA-TBA)定量检测试剂盒

20


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