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发布时间：2026/9/3 10:53:16 阅读次数：5
真菌/酵母ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
真菌/酵母ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂是一种旨在通过高氯酸酸性处理，碱性中和后，在高效液相色谱仪和紫外光度仪下（254nm波长）检测分析，分离出ATP、ADP或AMP波峰，以定量测定样品中腺嘌呤核苷酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母等裂解样品中ATP、ADP、AMP的含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
腺嘌呤核苷酸（adenine nucleotides），简称腺苷，包括单磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一种单体单位，为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）的组成成分，并提供化学能量，在能量代谢通路中维护诸如肌肉、胞膜等组织细胞结构的生化和生理功能，调节细胞糖酵解、三羧酸循环、电子传递系统、氧化磷酸化活动。腺嘌呤核苷酸在细胞中浓度低，且不稳定，通常通过其类型不同、浓度差异、分布状况，来评价细胞的代谢情况和能量状态。单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate；AMP），又称为5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylic acid），是一种在（脱氧）核糖核酸中发现的核苷酸。它是一种磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。分子式为C10H14N5O7P，分子量347。AMP可以通过腺苷酸激酶（adenylate kinase）催化2分子ADP生成，或通过ATP以及ADP水解产生。AMP常以腺苷-3',5'-环化一磷酸（cAMP）形式存在于细胞中。AMP与ATP之比反映细胞ATP生成状况以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷（adenosine diphosphate；ADP），参与ADP-ATP循环，提供热能转换和动态平衡，尤其在线粒体需氧呼吸、光合成等实现。三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。通过高氯酸酸性处理，排除蛋白质干扰，碱性中和后，在高效液相色谱仪和紫外光度仪下（254nm波长）检测分析，分离出ATP、ADP、AMP波峰，以定量其含量。
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
强化液（Reagent B） 克
酸性液（Reagent C） 毫升
中和液（Reagent D） 毫升
流相液A（Reagent E） 毫升
流相液B（Reagent F） 毫升
标准液（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存标准液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（Reagent C）和中和液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
4℃（微型）台式离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定
实验步骤
一、 样品准备
1． 准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升）
2． 移入到预冷的15毫升锥形离心管
3． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
4． 小心抽去上清液
5． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
6． 转移到预冷的1.5毫升离心管
7． 加入xx毫克强化液（Reagent B）
8． 强力涡旋震荡15秒
9． 置于冰槽里1分钟
10． 重复实验步骤8至9五次
11． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
12． 将所有细胞匀浆物移入1.5毫升离心管
13． 放进4℃（微型）台式离心机离心10分钟，速度为10000g（注意：可以移取10微升上清液进行蛋白定量——建议使用 Bradford 蛋白定量试剂盒——G&VS30030.1）
14． 小心移取360微升上清液到1.5毫升离心管
15． 加入xx微升预冷的酸性液（Reagent C）
16． 涡旋震荡1分钟
17． 放进4℃微型台式离心机再次离心10分钟，速度为6000g
18． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
19． 加入xx微升中和液（Reagent D），充分混匀
20． 置于冰槽里静置30分钟
21． 即刻移入上清液到新的1.5毫升离心管（注意：避免移取沉淀颗粒）
22． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里待测
二、测定准备
1． 开启仪器预热15分钟
2． 根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数
| 参数 | 推荐 | 补充说明 |
| 色谱柱 | 长度：25cm 直径：4.6mm | Waters仪器或 Agilent仪器 |
| 固定相 | ODS |
|
| 流动相 | 流相液A（Reagent E）和流相液B（Reagent F） | 参见运行程序 |
| 流速 | 1.3毫升/分钟 |
|
| 注射容量 | 50微升 | 10微升至100微升 |
| 检测 | 紫外 |
|
| 波长 | 254nm |
|
| 柱温 | 25℃ |
|
| 出峰时间（retention） | 5.6分钟（ATP）；6.5分钟（ADP）；10分钟(AMP) | 参考 |
| 运行时间 | 15分钟 | 参考 |
3． 运行程序
| 运行时段 | 程序 | 时间 |
| 开机后预运行 | 100% 流相液A（Reagent E） | 总10分钟 |
| 检测运行时段 | 100% 流相液A（Reagent E） 0%流相液B（Reagent F） | 0至9分钟 |
| 100% 流相液A（Reagent E）至 75% 流相液A（Reagent E） 0%流相液B（Reagent F）至25%流相液B（Reagent F） | 9至15分钟 | |
| 关机前运行 | 100% 流相液A（Reagent E） 0%流相液B（Reagent F） | 总10分钟 |
三、 标准样品配制
1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2． 分别加入xx微升流相液A（Reagent E）到1至5号管
3． 移取xx微升标准液（Reagent G）到1号管，混匀
4． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent G）到2号管，混匀
5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent G）到3号管，混匀
6． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent G）到4号管，混匀
7． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 流相液A（Reagent E） | 标准液（Reagent G） | 标准ATP/ADP/AMP浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | xx微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 0 | 0 |
四、色谱分析
1． 将上述配制的标准液（Reagent G）和待测样品放进冰槽里等待
2． 每次（每个样品）注射50微升
3． 按照检测运行程序每次（每个样品）运行15分钟
4． 获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录
五、计算样本ATP/ADP/AMP浓度
1． 方法一：通过仪器中的软件进行测算
2． 方法二：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为波峰面积（peak area）；横座标（X轴）为标准ATP/ADP/AMP浓度（微摩尔/升），根据标准曲线获得样品对应ATP/ADP/AMP浓度（微摩尔/升）
3． 方法三：公式计算（选择单一浓度的标准液）
样本ATP/ADP/AMP浓度（微摩尔/升）=【样本波峰面积（peak area）X标准ATP/ADP/AMP浓度】÷对应标准ATP/ADP/AMP浓度的波峰面积
样本ATP/ADP/AMP浓度（微摩尔/升）X 1.28（样本稀释倍数）=样本实际ATP/ADP/AMP浓度（微摩尔/升）
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准液
2． 操作时，须戴手套
3． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
4． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
5． 试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜
6． 酸性液（Reagent C）和中和液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全
7． 建议使用流相液A（Reagent E）作为阴性对照或作为基准线
8． 色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等
9． 用户可以使用已知浓度的标准液（Reagent G）作为内参标准加入到样品中，然后进行萃取，检测回收率（recovery）
10． 腺嘌呤核苷酸的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的标准液（Reagent G）实际出峰为准
11． 用户可以根据要求，计算实际浓度为：纳摩尔/毫升、纳摩尔/毫克蛋白、纳摩尔/毫克组织等
12． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13． 腺嘌呤核苷酸HPLC的参考图谱如下：
14． 本公司提供系列腺嘌呤核苷酸检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS10481.6 真菌/酵母ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 20次
G&VS10481.6A 裂解液（Reagent A） 毫升
G&VS10481.6B 强化液（Reagent B） 克
G&VS10481.6C 酸性液（Reagent C） 毫升
G&VS10481.6D 中和液（Reagent D） 毫升
G&VS10481.6E 流相液A（Reagent E） 毫升
G&VS10481.6F 流相液B（Reagent F） 毫升
G&VS10481.6G 标准液（Reagent G） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10481.1 | 通用型ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.6 | 细胞ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.3 | 组织ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.4 | 纯化线粒体ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.5 | 细菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.6 | 真菌/酵母ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10481.7 | 植物ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 | 20次 |
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