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神经突触体(synaptosome)粗提分离试剂盒产品说明书

发布时间:2026/9/3 10:56:02      阅读次数:3

 

神经突触体(synaptosome)粗提分离试剂盒产品说明书

 

主要用途

神经突触体(synaptosome)粗提分离试剂是一种旨在从动物神经细胞或组织中分离出完整而纯化的突触体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物组织(包括脑皮质、纹状体、海马等)和培养神经细胞的突触体的制备。其制备物产量高,可以被用于神经传导介质、信号传递、蛋白组学和神经性疾病的病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量和纯度俱佳

 

技术背景

突触体(synaptosome),又称为纯化的神经末端(nerve terminals),源自于神经轴突(axons)和突触后连接(postsynaptic connections),内含有细胞浆、突触囊泡(synaptic vesicleSV)、突触后致密区(postsynaptic densityPSD)、线粒体和细胞骨架等结构,其具有生产ATP,具备功能性离子通道、载体和受体,维持膜电位和离子内平衡、摄取和释放神经传导介质(neurotransmitters),胞饮(endosytosis)等功能。突触体成为脑组织中突触功能分子机制研究的模型系统,以提供足够的蛋白生化材料,识别主要的神经传导介质及其代谢活性、摄取和释放机制,发现突触传导调节信号通路,包括学习、记忆、感觉整合、运动调度和情绪反应等,研究突触功能异常与衰老和神经性疾病的相关性。突触体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。从组织或神经细胞分离突触体的技术方法基本上采用:第一,通过机械方法破裂组织细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑巨大细胞器(细胞核),剥离神经末端部分,且重新封口,形成膜性液囊(sac;第三,通过高速差速离心获得突触体、质膜、髓磷脂(myelin)、内质网、突触体外线粒体;甚至第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的突触,去除髓磷脂(myelin)和突触体外线粒体 

 

产品内容

清理液(Reagent A    毫升

裂解液(Reagent B      毫升

保存液(Reagent C    毫升

产品说明书         1

 

保存方式

保存裂解液(Reagent B)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,有效保证6

 

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液(G&VS12028)或PBS缓冲溶液(G&VS12033):用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024):用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052):用于细胞处理所需的培养基

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于样品操作的容器

4台式离心机:用于样品操作

4超速离心机:用于样品操作

DOUNCE匀浆器:用于裂解组织细胞

 

实验步骤

一、 组织突触体分离

1. 手术取出动物组织,并秤重以确定1克组织重量 

2. (选择步骤)放进预冷的50毫升锥形离心管

3. (选择步骤)加入xx毫升清理液(Reagent A清洗1

4. 即刻用刀片切碎组织

5. 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6. 加入xx毫升预冷的裂解液Reagent B

7. 涡旋震荡5秒,充分混匀

8. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

9. 在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约2040下)(注意:参见注意事项8

10. 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

11. 放进4台式离心机离心10分钟,速度为1000g

12. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

13. 放进4超速离心机离心30分钟,速度为15000g

14. 小心抽去上清液,保留沉淀颗粒——此步骤获得突触体沉淀物

15. (选择步骤)加入xx毫升预冷的保存液(Reagent C

16. (选择步骤)放进4超速离心机再次离心15分钟,速度为15000g

17. (选择步骤)小心抽去上清液

18. 加入xx毫升保存液(Reagent C,充分混匀

19. 即刻移入1.5毫升离心管,放进-70冰箱里

 

二、细胞突触体分离

1. 准备51075cm2细胞培养瓶的细胞(5 X 107),直至细胞生长铺满整个培养表面

2. 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面,然后抽去

3. 重复实验步骤2一次

4. 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个细胞生长表面

5. 置入37培养箱3分种

6. 轻轻手击震动培养瓶,使细胞脱落,

7. 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液

8. 移入一个50毫升锥形离心管

9. 放进台式离心机离心10分钟,速度为200g

10. 小心抽去上清液

11. 加入xx毫升预冷的清理液(Reagent A),混匀细胞

12. 放进台式离心机离心10分钟,速度为300g

13. 小心抽去上清液

14. 加入xx毫升预冷的裂解液Reagent B

15. 涡旋震荡5秒,充分混匀细胞颗粒群

16. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

17. 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞(约2040下)(注意:参见注意事项8

18. 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管

19. 放进4台式离心机离心10分钟,速度为1000g

20. 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

21. 放进4超速离心机离心30分钟,速度为15000g

22. 小心抽去上清液,保留沉淀颗粒——此步骤获得突触体沉淀物

23. (选择步骤)加入xx毫升预冷的保存液(Reagent C

24. (选择步骤)放进4超速离心机再次离心15分钟,速度为15000g

25. (选择步骤)小心抽去上清液

26. 加入xx毫升保存液(Reagent C,充分混匀

27. 即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里

 

注意事项

1. 本产品为10次(1克动物组织或5 X 107细胞)操作

2. 实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整:例如200毫克动物组织:试剂用量是标准用量的五分之一

3. 所有操作均须严格在4或以下状态进行

4. 操作时,须戴手套

5. 操作时,须无菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B保存液(Reagent C

6. 建议使用足够的样品量

7. 建议严格控制操作时间

8. 通常匀化次数为2040下(或细胞颗粒群/组织块状消失为止)达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加匀化次数

9. 通常1克动物组织或5 X 107细胞的突触体含量为24克以上突触体蛋白

10. 如果需要获得99%以上纯度的突触体,使用神经突触体(synaptosome)高纯分离试剂盒G&VS10482.3 

11. 本公司提供系列突触体分析试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定分离的突触结构完整

3. 本产品经鉴定分离的突触体维持正常活性

4. 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

单组分订购信息

编号            名称                         规格

G&VS10482.1     神经突触体(synaptosome)粗提分离试剂盒     10/

G&VS10482.1A    清理液(Reagent A                  毫升

G&VS10482.1B    裂解液(Reagent B                   毫升

G&VS10482.1C    保存液(Reagent E                   毫升

G&VS12024      胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液               毫升

G&VS12028      HANKS平衡盐缓冲溶液                  毫升

G&VS12033      PBS缓冲溶液                        毫升

G&VS12052      DMEM完全细胞培养基                   毫升

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10482.1

神经突触体(synaptosome)粗提分离试剂盒

10

G&VS10482.2

神经突触体(synaptosome)活性分离试剂盒

10

G&VS10482.3

神经突触体(synaptosome)高纯分离试剂盒

10

G&VS10496

神经突触体(synaptosome)冻存试剂盒

50

G&VS10497

神经突触囊泡(synaptic vesicle)分离试剂盒

10

G&VS10498

神经突触体摄取/释放荧光检测试剂盒

20

 

 


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