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脂滴(lipid droplet)分离试剂盒产品说明书

发布时间:2026/9/4 9:20:30      阅读次数:2

 

脂滴(lipid droplet)分离试剂盒产品说明书

 

主要用途

脂滴(lipid droplet)分离试剂是一种旨在通过物理和化学破膜以及等密度超速离心处理方法,分离出完整而纯化的脂滴组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物和人体细胞脂滴成分的分离产品即到即用,操作简易,性能稳定,无核酶和蛋白酶污染。 

 

技术背景

脂滴(lipid droplet)是细胞中由中性脂质(甘油三酯、胆固醇酯)和少量蛋白为核心,外包一层磷脂和胆固醇构成的带有蛋白的膜。可见于大多数培养细胞中。在脂肪细胞中,脂滴存储大量甘油三酯,作为能量之源,而在其它细胞中,用于胆固醇内平衡的维持。脂滴具有帮助膜合成和修复,固醇类激素合成,以及提供脂类代谢酶的底物等功能。通过差速和等密度离心处理,获得脂滴细胞器,用于后续脂质定量和蛋白分离等。  

 

产品内容

清理液(Reagent A    毫升

低渗液(Reagent B    毫升

分离液AReagent C   毫升

分离液BReagent D   毫升

产品说明书          1份

 

保存方式

保存低渗液(Reagent B在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里有效保证6

 

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液(G&VS12028)或PBS缓冲溶液(G&VS12033):用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024):用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052):用于中和胰蛋白酶的细胞培养基

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

台式离心机:用于样品操作

超速离心机:用于样品操作

DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞

涡旋震荡仪:用于混匀

 

实验步骤

实验开始前,将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。

 

1. 准备51075cm2细胞培养瓶的细胞(5 X 107),直至细胞生长铺满整个培养表面

2. 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面,然后抽去

3. 重复实验步骤2一次

4. 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面

5. 置入37培养箱3分种

6. 轻轻手击震动培养瓶,使细胞脱落

7. 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液

8. 移入一个50毫升锥形离心管

9. 放入台式离心机离心10分钟,速度为1000g

10. 小心抽去上清液

11. 加入xx毫升预冷的清理液(Reagent A),混匀细胞

12. 放入台式离心机离心10分钟,速度为1000g

13. 小心抽去上清液

14. 加入预冷的xx毫升低渗Reagent B

15. 涡旋震荡5秒,充分混匀

16. 冰上孵育10分钟

17. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

18. 置于冰槽里用匀浆棒匀化细胞(约40下)

19. 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管 

20. 放进4台式离心机离心10分钟,速度为1000g

21. 小心移出1毫升白色悬浮脂质层到新的15毫升锥形离心管

22. 放进-70冰箱里备用或放进冰槽里继续后续操作

23. 加入预冷的xx分离AReagent C,混匀(注意:将脂质团均匀混匀)

24. 转移到13毫升超速离心管

25. 小心沿着管壁,在样品上面,一滴一滴加入xx毫升分离BReagent D(注意:避免晃动)

26. 小心沿着管壁,一滴一滴加入xx毫升低渗Reagent B分离BReagent D上面,直至加满离心管(注意:避免晃动)

27. 小心放进4超速离心机离心30分钟,速度为28000g 

28. 小心取出离心管 

29. 小心抽取悬浮不透明的白色脂质层到新的15毫升离心管 

30. 加入适量预冷的低渗Reagent B,混匀

31. 放进-70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作(脂质定量、脂滴蛋白萃取等)

 

注意事项

1. 本产品为10次操作(5 X 107细胞/  

2. 建议使用足够的组织或细胞量

3. 样品操作均须在4或以下状态下进行

4. 操作时,须无菌操作,避免污染母液,尤其是分离液AReagent C分离液BReagent D

5. 用户可以使用脂肪酸结合白蛋白进行诱导实验

6. 如果进行后续纸质蛋白萃取,用于蛋白电泳和WESTERN再叫,建议使用脂滴蛋白萃取试剂盒—G&VS30150

7. 用户可以使用脂滴标记蛋白亲脂素(adipophilin)或脂滴包被蛋白perilipin)进行验证

8. 本公司提供系列脂滴分析技术产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性

3. 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

单组份订购信息

编号            名称                                 规格

G&VS10523   脂滴(lipid droplet)分离试剂盒    10

G&VS10523A   清理液(Reagent A          毫升

G&VS10523B   低渗液(Reagent B          毫升

G&VS10523C   分离AReagent C        毫升

G&VS10523D   分离BReagent D       毫升

 

试剂盒订购信息 

产品编号

名称

规格

G&VS10523

脂滴(lipid droplet)分离试剂盒

10

G&VS10589.1

细胞脂滴BODIPY荧光染色试剂盒

20

G&VS10589.2

组织脂滴BODIPY荧光染色试剂盒

20

G&VS10589.3

真菌/酵母细胞脂滴BODIPY荧光染色试剂盒

20

G&VS10590.1

细胞脂滴尼罗红荧光染色试剂盒

20

G&VS10590.2

组织脂滴尼罗红荧光染色试剂盒

20

G&VS10590.3

真菌/酵母细胞脂滴尼罗红荧光染色试剂盒

20

G&VS30150

脂滴蛋白萃取试剂盒

20

 

 


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