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钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/4 9:26:44 阅读次数：4

钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂盒产品说明书

主要用途

钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂是一种旨在通过电变色苯乙烯荧光探针，应对膜性囊泡产生电位梯度变化，而产生荧光变化，来分析和观察钠钾离子转运功能，进一步评价P型ATP酶中的Na⁺-K⁺ ATP酶功能的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体等细胞钠钾离子转运活性，即P型ATP酶的Na⁺-K⁺ ATP酶功能的检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞膜上的膜整合蛋白（integral membrane protein）参与细胞内外的物质传输、能量产生与转化等生物学过程，构成离子或代谢分子的通道，常见的包括氢离子、钠离子、钾离子等电解质，在能量依赖型或非依赖型的条件下，完成生理代谢的物质交换。膜通道转运功能检测（transport或uptake assay）用于分析转运蛋白（transport protein）和底物（substrate）的功能、筛选通道抑制剂、进而发现药物以及抗药性机制。建立分子构建的载体或宿主模型、分离膜性囊泡（membrane vesicle）包括正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）或内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV），通过标记底物的转运，来定量测定转运活性。钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋-ATPase；EC3.6.1.3），是五类ATP酶（F、V、A、P和E型）中P型ATP酶（P type ATPase）之一。ATP酶催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。这一去磷酸化反应释放出能量，成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白（transmembrane），帮助传输各种代谢分子进出细胞。P型ATP酶，又称为E1-E2 ATP酶，通常由一条或两条多肽构成，且呈现两种主要的结构构象E1和E2。这类ATP酶存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上，其功能在于水解ATP获得能量，跨膜运输各种化学分子（post albers cycle）。P型ATP酶可以分成4种，Ca²⁺传输性、Na⁺-K⁺ /H⁺-K⁺传输性、H⁺传输性和所有细菌型等。其中钠/钾ATP酶，又称为钠钾泵或钠泵（Na⁺-K⁺ pump），是一种电致（electrogenic）膜蛋白。细胞排（3分子）钠吸（2分子）钾时，细胞膜两边无电荷流动，并建立细胞内外离子（胞内低钠、胞外高钾）浓度平衡，维持细胞静态膜电位（电化学电位梯度），控制细胞容量，调节pH，调节神经和肌肉兴奋性，以及碳水化合物、氨基酸和维生素的摄入等。钠/钾ATP酶是心脏病的重要药物靶标。通过使用电变色苯乙烯荧光探针RH421，为膜电压敏感性两性离子染料，在钠/钾ATP酶和ATP的存在下，产生电化学电位梯度，使红色荧光发生升高或降低的变化（激发波长580nm，散发波长670nm），以分析转运蛋白P型ATP酶中Na^＋/K^＋ ATP酶的功能，以及其抑制剂的筛选。

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升

染色液（Reagent B）微升

反应液（Reagent C）毫升

补充液（Reagent D）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证6月

用户自备

恒温水槽或培养箱：用于反应孵育

500微升比色皿：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪：用于荧光定量分析

实验步骤

一、 样品准备

1．确定测定对象：动物/人体细胞

2．分离膜性囊泡（注意：建议使用系列分离试剂盒产品）

3．准备好待测的分离样品，并测定钠/钾ATP酶活性

4．置于冰槽里备用

二、 测定准备

1．开启并设定好荧光分光光度仪（温度为22℃）：激发波长为580nm，散发波长670nm，实时测读；增益倍数100至200

2．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置于室温下冻融预热，避免光照。然后进行下列操作

三、 荧光测定

1．准备1个500微升比色皿，并标记为对照样品管或抑制剂样品管

2．加入小xx微升缓冲液（Reagent A）

3．加入x微升染色液（Reagent B）

4．在22℃恒温水槽孵育5分钟

5．加入xx微升补充液（Reagent D）到对照样品管

6．或加入20微升用户自备的抑制剂（注意：使用各种浓度梯度）到抑制剂样品管

7．加入20微升待测样品（12微克蛋白）到对照样品管或抑制剂样品管，混匀

8．即刻放进荧光分光光度仪（激发波长为580nm，散发波长670nm）：获得0分钟荧光读数（F0）或实时测读1分钟

9．加入xx微升反应液（Reagent C），枪头吹打混匀（注意：建议直接在仪器的比色皿槽里操作）

10．即刻实时测读3分钟：获得荧光曲线或3分钟荧光读数（F）――RFU降低，表明转运功能活性增强（注意：参见注意事项9）

11．构建转运曲线：纵座标（Y）为相对荧光单位（RFU），横座标（X）为时间（秒）

12．构建抑制曲线：纵座标（Y）为相对荧光比（F—F0）/F0，横座标（X）为抑制剂浓度（微摩尔）

注意事项

1．本产品为20次操作

2．操作时，须戴手套

3．建议用户使用本公司的膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒准备样品

4．建议一次单个操作

5．孵育时，避免光照

6．建议进行实时荧光检测分析

7．纵坐标可以使用相对荧光读数（RFU）或荧光比（F—F0）/F0

8．用户可以在某个时间点，加入用户自备的氯化钠、氯化钾、ATP或磷酸盐等，观察转运走势变化

9．参考图像：加入不同反应液的实时曲线

10．本公司提供系列离子膜通道转运功能（transport/uptake）分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10493.2 钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂盒 20次

G&VS10493.2A 缓冲液（Reagent A）毫升

G&VS10493.2B 载体液（Reagent B）毫升

G&VS10493.2C 反应液（Reagent C）毫升

G&VS10493.2C 补充液（Reagent C）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10493.1	钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能原子光度检测试剂盒	20次
G&VS10493.2	钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能红色荧光检测试剂盒	20次
G&VS10493.3	钠钾泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能绿色荧光检测试剂盒	20次
G&VS50240.1	动物细胞钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋－ATPase）活性光度法定量检测试剂盒	20次
G&VS50240.2	动物组织钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋－ATPase）活性光度法定量检测试剂盒	20次
G&VS50240.3	细菌钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋－ATPase）活性光度法定量检测试剂	20次
G&VS50240.4	真菌/酵母钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋－ATPase）活性光度法定量检测试剂盒	20次
G&VS50240.5	植物钠/钾ATP酶（Na^＋/K^＋－ATPase）活性光度法定量检测试剂盒	20次