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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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内质网膜蛋白制备试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/4 11:02:35 阅读次数：4

内质网膜蛋白制备试剂盒产品说明书

主要用途

内质网膜蛋白制备试剂是一种旨在通过机械或化学处理和差速离心方法，从动物细胞或组织中分离出完整的内质网细胞器组分，进而化学破膜处理获得膜蛋白成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种培养细胞或组织（人体、动物等）的内质网膜蛋白的制备。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量高。

技术背景

内质网（endoplasmic reticulum；ER）是真核生物的细胞器组分，构成细胞内小管（tubules）、囊泡（vesicles）和小池（cisternae/sac）相互连接的网络结构，负责蛋白转译、折叠和转运成为细胞膜成分（例如跨膜受体和其它整合膜蛋白等）或分泌型蛋白（例如消化性酶），负责钙离子区隔（sequestration），以及糖原、固醇类和其它大分子的生产和储存等功能。内质网分成三种：粗面内质网（Rough endoplasmic reticulum；RER）、滑面内质网（Smooth endoplasmic reticulum；SER）和肌质网（sarcoplasmic reticulum；SR）。根据细胞代谢的需要，粗面内质网和滑面内质网会互相转换。粗面内质网通过核糖体合成蛋白质并分类；滑面内质网进行固醇、碳水化合物和药物代谢等。肌质网的主要功能为储存和释放钙离子。内质网膜与核糖体结合、多肽转运与处理、信号识别受体等功能相关。内质网膜的分离方法包括：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得内质网；第四，通过化学破膜获得内质网膜蛋白。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

净化液（Reagent C）毫升

保存液（Reagent D）毫升

去干扰液（Reagent E）毫升

破膜液（Reagent F）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存净化液（Reagent C）和破膜液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基

50毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

1.5毫升离心管：用于样品保存的容器

6毫升超速离心管：用于超高速离心的容器

4℃（微型）台式离心机：用于样品制备

DOUNCE匀浆器：用于裂解（组织）细胞

实验步骤

一、 细胞样品处理

实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）到xx毫升的裂解液（Reagent B）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。

1．准备5至10瓶75cm²细胞培养瓶的细胞（5 X 10⁷），直至细胞生长铺满整个培养表面

2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去

3．重复实验步骤2一次

4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面

5．置入37℃培养箱3分种

6．轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，

7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液

8．移入一个50毫升锥形离心管

9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g

10．小心抽去上清液

11．加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞

12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g

13．小心抽去上清液

14．加入预冷的xx毫升裂解工作液

15．涡旋震荡5秒，充分混匀

16．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

17．在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20至40下）（注意：参见注意事项7）

18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管

19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g

20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

21．放进4℃超速离心机离心15分钟，速度为12000g

22．小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）

23．放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为100000g

24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内质网组分

25．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

26．加入xx毫升去干扰液（Reagent E），混匀

27．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

28．小心抽去上清液

29．重复实验步骤25至28二次

30．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

31．加入xx毫升破膜液（Reagent F），混匀

32．置于冰槽里孵育10分钟

33．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

34．小心抽去上清液

35．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

36．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

37．小心抽去上清液

38．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

39．转移到1.5毫升离心管

40．放进－70℃冰箱里保存

二、 组织样品处理

1．手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定1克组织重量（实验前最好使动物空腹12至24小时）

2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4．即刻用刀片切碎组织

5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6．加入预冷的xx毫升裂解工作液

7．涡旋震荡5秒，充分混匀

8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

9．在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项7）

10．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

11．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g

12．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

13．放进4℃超速离心机离心15分钟，速度为12000g

14．小心移出上清液到预冷的6毫升超速离心管——此步骤获得后线粒体组分（post mitochondrial fraction；PMF）

15．放进4℃超速离心机再次离心60分钟，速度为100000g

16．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得内质网组分

17．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

18．加入xx毫升去干扰液（Reagent E），混匀

19．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

20．小心抽去上清液

21．重复实验步骤25至28二次

22．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

23．加入xx毫升破膜液（Reagent F），混匀

24．置于冰槽里孵育10分钟

25．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

26．小心抽去上清液

27．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

28．放进4℃超速离心机再次离心30分钟，速度为100000g

29．小心抽去上清液

30．加入xx毫升保存液（Reagent D），充分混匀沉淀物

31．转移到1.5毫升离心管

32．放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1．本产品为20次（5 X 10⁷细胞/次或1克动物组织/次）操作

2．操作时，须戴手套

3．操作时，避免污染母液

4．所有操作均须在4℃或以下状态进行

5．建议使用足够的样品量

6．建议严格控制操作时间

7．通常匀化次数为20至40下（或细胞或组织颗粒消失为止）达到80％的（组织）细胞裂解为理想状态，但不同的（组织）细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的（组织）细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数

8．通常5 X 10⁷细胞或1克动物组织的内质网膜蛋白含量可达3毫克

9．内质网膜的标志蛋白是葡萄糖6-磷酸酶（glucose 6-phosphatase）可达14倍高活性；建议使用葡萄糖6-磷酸酶活性光度法定量检测试剂盒－G&VS50915

10．本公司提供系列亚细胞结构分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定分离的内质网膜蛋白维持正常活性

3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10492 内质网膜蛋白制备试剂盒 10次

G&VS10492A 清理液（Reagent A） 100毫升

G&VS10492B 裂解液（Reagent B） 100毫升

G&VS10492C 净化液（Reagent C） 50毫升

G&VS10492D 保存液（Reagent D） 100毫升

G&VS10492E 抗干扰液（Reagent E） 100毫升

G&VS10492F 破膜液（Reagent F） 50毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10005	亚细胞结构分离试剂盒	10次
G&VS10492	动物细胞内质网粗提分离试剂盒	10次
G&VS10040.1.1	动物组织内质网粗提分离试剂盒	10次
G&VS10040.2.1	动物细胞活性内质网分离试剂盒	10次
G&VS10040.2.2	动物组织活性内质网分离试剂盒	10次
G&VS10040.3.1	动物细胞高纯内质网分离试剂盒	10次
G&VS10040.3.2	动物组织高纯内质网分离试剂盒	10次
G&VS10041.1	通用型内质网形态染色试剂盒	100次
G&VS10041.2	内质网形态高质染色试剂盒	20次
G&VS10066.1	动物组织肌质网粗提分离试剂盒	10次
G&VS10066.2	动物组织活性肌质网分离试剂盒	10次
G&VS10066.3	动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒	10次
G&VS10066.4	动物组织肌质网横小管（T Tube）分离试剂盒	10次
G&VS10066.5	动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒	10次
G&VS10492	内质网膜蛋白制备试剂盒	20次