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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细菌多聚核糖体（polysome）分离试剂盒产品说明书

发布时间：2026/9/4 11:04:17 阅读次数：4

细菌多聚核糖体（polysome）分离试剂盒产品说明书

主要用途

细菌多聚核糖体（polysome）分离试剂是一种旨在通过物理和化学破膜以及等密度超速离心处理方法，分离出完整而纯化的多聚核糖体组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种细菌菌种多聚核糖体成分的分离。可以用于后续信使RNA转译效率的确定和多聚核糖体相关因子的生化分析等。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶和蛋白酶污染，萃取纯度和产量皆高。

技术背景

核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞质（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，分子量为4.2MDs，由40S小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，分子量为2.7MDs，由30S小亚体和50S大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。多聚核糖体（polysome）是核糖体复合体，伴随蛋白质合成过程中的活化的单链信使RNA。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

酶解液（Reagent C）微升

分离液A（Reagent D1）毫升

分离液B（Reagent D2）毫升

保存液（Reagent E）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）和酶解液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器

超速离心管：用于样品操作的容器

台式离心机：用于样品操作

超速离心机：用于样品操作

涡旋震荡仪：用于混匀

96孔板：用于样品收集的容器

酶标仪：用于核糖体检测

PARAFFIN封口膜：用于密封离心管

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。

1）细菌裂解

1．准备100毫升指数生长期的待测细菌样品（OD600=0.5至0.6；5 X 10⁸/毫升）

2．转移到2个50毫升锥形离心管

3．放入台式离心机离心10分钟，速度为2500g

4．小心抽去上清液

5．分别加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀颗粒群

6．合并到1个50毫升锥形离心管

7．放入台式离心机离心10分钟，速度为2500g

8．小心抽去上清液

9．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）

10．涡旋震荡5秒，充分混匀

11．加入xx微升酶解液（Reagent C），混匀

12．置于冰槽里孵育2分钟

13．置于－80℃冰箱里孵育1小时

14．置于冰槽里融化

15．转移到超速离心管

16．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为30000g

17．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管

18．移取5微升进行A260测读（注意：可以获得100单位A260）

19．移取适量的样品，加入保存液（Reagent E）调节为500微升含有10单位A260

20．置于冰槽里备用

2）分离液配制

1．移取xx毫升分离液A（Reagent D1）到10毫升超速离心管

2．移取xx毫升分离液B（Reagent D2），枪头插入到10毫升超速离心管的底部

3．缓慢加入，避免气泡（见下图）

4．使用PARAFFIN封口膜密封管口

5．小心缓慢放平离心管

6．室温下，静置60分钟

7．小心缓慢竖起离心管

8．放进4℃冰箱里备用（注意：不宜超过24小时）

9．操作示意图如下

3）多聚核糖体分离

1．小心从4℃冰箱里取出离心管

2．小心沿着管壁，在分离液（Reagent D）上面，一滴一滴加入350至500微升上述获得的10单位A260样品悬液（注意：避免晃动，同时离心前，使用矿物油填满离心管）

3．小心放进4℃超速离心机离心8小时，速度为80000g（注意：使用悬吊式转子；0制动）

4．小心取出离心管

5．固定在支架上

6．使用1毫升枪头，从离心管下三分之一处，依次移取250微升（参见下面示意图）

7．转移到96孔板的相应孔里（注意：做好标记）

8．即刻放进酶标仪测读（波长为260nm）。获得吸光读数

9．构建曲线图：纵坐标为OD260，横坐标为96孔板标号（见下面示意图）

10．合并所有多聚核糖体的溶液

11．转移到6毫升超速离心管

12．加满保存液（Reagent E）

13．放进4℃超速离心机离心18小时，速度为250000g

14．小心取出离心管

15．小心抽去上清液

16．加入xx微升保存液（Reagent E），混匀颗粒群

17．转移到新的1.5毫升离心管

18．（选择步骤）进行核糖体定量测定（A260）

19．放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作

注意事项

1．本产品为10次操作（5 X 10¹⁰细菌/次）

2．建议使用足够的细菌量

3．样品操作均须在4℃或以下状态下进行

4．用户可以使用分离液仪器（gradient maker）配制

5．操作时，须无菌操作，避免污染母液

6．用户可以使用自动组分收集器收集离心后的样品

7．核糖体定量计算公式（微克/微升）： A260 ¸ 11.1或（皮摩尔/毫升）：A260 X 19

8．用户可以使用Biuret法或OD值进行定量

9． 5 X 10⁹细菌可获得多聚核糖体100至200微克

10．如果进行核糖体蛋白萃取，建议使用纯化核糖体蛋白质萃取试剂盒—G&VS16041

11．本公司提供系列核糖体分析技术产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性

3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS10557.4 细菌多聚核糖体（polysome）分离试剂盒 10次

G&VS10557.4A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10557.4B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS10557.4C 酶解液（Reagent C）毫升

G&VS10557.4D 分离液A（Reagent D1）毫升

G&VS10557.4E 分离液B（Reagent D2）毫升

G&VS10557.4F 保存液（Reagent E）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10557.1	细胞/组织多聚核糖体（polysome）分离试剂盒	10次
G&VS10557.2	真菌/酵母多聚核糖体（polysome）分离试剂盒	10次
G&VS10557.3	植物多聚核糖体（polysome）分离试剂盒	10次
G&VS10557.4	细菌多聚核糖体（polysome）分离试剂盒	10次