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发布时间：2026/9/4 11:06:43 阅读次数：2
动物细胞质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒产品说明书
主要用途
动物细胞质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂是一种旨在通过等密度离心技术从动物细胞中分离出高度纯化的质膜膜性囊泡包括正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物、人体细胞质膜膜性囊泡的制备。其制备物产量高，可以被用于膜通道、信号传导机制、膜蛋白分布等研究。产品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。
技术背景
膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和内侧外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）。正常外向质膜膜性囊泡是通过去除所有细胞浆内容物，包括微粒体和线粒体等，使之失去细胞内在的代谢系统，同时保持质膜的原始位相，有利于提供适合的底物，不会受到降解和代谢，建立动力机制，进行转运或摄入研究，以及膜成分分析。而内侧外翻质膜膜性囊泡是通过裂解细胞或再次裂解囊泡后，质膜重新闭合形成内侧面外翻的囊泡状结构，广泛用于原发性转运系统的研究。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
平衡液（Reagent B） 毫升
保存液（Reagent C） 毫升
分离液A（Reagent D） 毫升
分离液B（Reagent E） 毫升
分离液C（Reagent F） 毫升
高纯液A（Reagent G） 毫升
高纯液B（Reagent H） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
2毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
6毫升超速离心管：用于样品操作的容器
4℃微型台式离心机：用于样品操作
4℃超速离心机：用于分离膜性囊泡
1毫升和10毫升DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
实验步骤
1． 准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 108），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入xx毫升预冷的平衡液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀
16． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
17． 在冰槽里用研磨棒匀化细胞，直至细胞颗粒消失
18． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管
19． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
20． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
21． 放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g
22． 小心移去上清液，保留沉淀颗粒
23． 加入xx毫升保存液（Reagent C），混匀颗粒群
24． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
25． 在冰槽里用研磨棒匀化颗粒群（约40下）
26． 将所有匀浆物移入1.5毫升离心管
27． 放进－70℃冰箱里备用或放进冰槽里继续后续操作
28． 移取xx毫升的分离液A（Reagent D）到6毫升超速离心管（注意：使用前摇匀分离液A(Reagent D)）
29． 轻轻加入xx毫升分离液B（Reagent E）在分离液A（Reagent D）的上面，避免震动（注意：使用前摇匀分离液B(Reagent E)）
30． 轻轻加入xx毫升分离液C（Reagent F）在分离液B（Reagent E）的上面，避免震动（注意：使用前摇匀分离液C(Reagent F)）
31． 轻轻加入xx微升上述匀浆物在分离液C（Reagent F）的上面，避免震动
32． 放进4℃超速离心机离心16小时，速度为60000g
33． 小心取出超速离心管：可见分离液B（Reagent E）和分离液C（Reagent F）交界处样品带
34． 小心抽去样品带以上的液体
35． 小心收集样品带到2毫升离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）
36． 加入xx至xx毫升保存液（Reagent C）
37． 放进4℃超速离心机离心2小钟，速度为100000g
38． 小心抽去上清液
39． 加入xx微升保存液（Reagent C），混匀
40． 移取xx毫升的高纯液A（Reagent G）到6毫升超速离心管（注意：使用前摇匀高纯液A(Reagent G)）
41． 轻轻加入xx毫升高纯液B（Reagent H）在高纯液A（Reagent G）的上面，避免震动（注意：使用前摇匀高纯液B(Reagent H)）
42． 轻轻加入600微升上述样品在高纯液B（Reagent H）的上面，避免震动
43． 放进4℃超速离心机离心16小时，速度为60000g
44． 小心取出超速离心管：可见顶端样品带
45． 小心收集样品带到2毫升离心管
46． 加入xx至xx毫升保存液（Reagent C）
47． 放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g
48． 小心抽去上清液
49． 分别加入xx微升保存液（Reagent C）――此为质膜RSOV组分
50． 移取10微升进行蛋白质定量测定（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
51． 连续－70℃至37℃冻融4次――此为质膜IOV组分
52． 即刻放进－70℃冰箱里保存
注意事项
1． 本产品为10次（5 X 108动物细胞/次）操作
2． 所有操作均须在4℃或以下状态进行
3． 建议使用足够的样品量
4． 严格无菌操作。避免污染母液
5． 通常5 X 108动物细胞的质膜囊泡含量为50微克蛋白；大小为200至500纳米
6． 质膜IOV组分为粗提分离产物，其中含有RSOV和未予闭合的质膜不等，如果需要获得95％以上的高纯度的IOV，建议使用 IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒－G&VS10170
7． 纯化的样品避免反复冻融
8． 本公司提供系列膜性囊泡制备试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定分离组分维持正常活性
3． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10554.1 动物细胞质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒 20次
G&VS10554.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10554.1B 平衡液（Reagent B） 毫升
G&VS10554.1C 保存液（Reagent C） 毫升
G&VS10554.1D 分离液A（Reagent D） 毫升
G&VS10554.1E 分离液B（Reagent E） 毫升
G&VS10554.1F 分离液C（Reagent F） 毫升
G&VS10554.1G 高纯液A（Reagent G） 毫升
G&VS10554.1H 高纯液B（Reagent H） 毫升
G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10169.1 | 动物细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.2 | 动物组织膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.3 | 真菌/酵母膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.4 | 细菌膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10169.5 | 红细胞膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS16021 | 植物膜性囊泡（RSOV和IOV）制备试剂盒 | 20次 |
| G&VS10170 | IOV膜性囊泡高质纯化试剂盒 | 10次 |
| G&VS10554.1 | 动物细胞质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒 | 10次 |
| G&VS10554.2 | 动物组织质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒 | 10次 |
| G&VS10554.3 | 植物质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒 | 10次 |
| G&VS10554.4 | 真菌/酵母质膜膜性囊泡（RSOV和IOV）高纯分离制备试剂盒 | 10次 |
| G&VS10555 | 鬼影细胞（ghost cell）制备试剂盒 | 10次 |
| G&VS10556 | 鬼影细胞（ghost cell）酶法检测试剂盒 | 20次 |
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