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发布时间：2026/9/4 11:08:49 阅读次数：2
纯化溶酶体内PH水平荧光检测试剂盒产品说明书
主要用途
纯化溶酶体内PH水平荧光检测试剂是一种旨在通过高度敏感的pH依赖性向酸性荧光探针Yellow/Blue DND160 AM，其荧光信号比的增强或减弱说明溶酶体内酸性环境的变化，即pH的增高或降低，来分析溶酶体内环境平衡的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种溶酶体制备物的pH变化的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景
溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为4.5至5.0左右。溶酶体内酶蛋白在酸性环境下，发挥最优活性效应。一旦pH发生变化，将干扰其降解来自于吞噬作用或自体吞食通路产生的废弃物质的能力。溶酶体内pH的升高，将减慢酶的活力，降低降解能力，损害水解作用，堆积残弃物质等。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachs disease）和庞贝氏症 （Pompe’s disease）。溶酶体pH荧光探针LysoSensor Yellow/Blue DND160 AM（(2-(4-pyridyl)-
5-((4-(2-dimethylaminoethylamino-arbamoyl) methoxy)-phenyl)oxazole acetoxy-methyl ester），是一种向酸性（acidotropic）pH依赖性探针，通过其双重散发波长（451nm和518nm）产生的荧光信号比（激发波长360nm）来分析溶酶体内酸性环境的变化程度：pH升高，荧光显色为蓝色；反之，则为绿色。其蓝色和绿色的比值升高，表明溶酶体内酸性环境受到损害。
产品内容
保存液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
稀释液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于溶酶体染色的容器
微型台式离心机：用于样品操作
比色皿或黑色96孔板：用于荧光定量的容器
（共聚焦）荧光显微镜：用于溶酶体荧光定性分析
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于溶酶体荧光定量分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入室温下融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent C），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
从纯化的溶酶体样品中移出至少含107细胞中提取的溶酶体到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里
加入适量的保存液（Reagent A）至最终容量为50微升（含有50微克溶酶体蛋白质为理想状态）
加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液，轻柔混匀
放进暗室里，在室温下孵育5分钟（注意：检测前置于冰槽里）
放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g
小心抽去上清液
加入xx微升保存液（Reagent A），轻柔混匀颗粒群
放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g
小心抽去上清液
重复实验步骤7至9二次
加入xx微升保存液（Reagent A），轻柔混匀颗粒群
选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察
混匀后，移出50微升在载玻片上
即刻进行载玻片压片，在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：
观察蓝色荧光：滤波器激发波长360nm，散发波长451nm ――可见蓝色荧光；如果强度显著增强，表明溶酶体酸性环境受到破坏
观察绿色荧光：滤波器激发波长360nm，散发波长518nm ――可见绿色荧光；如果强度显著减弱，表明溶酶体酸性环境受到破坏
选择二、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
混匀后，移出100微升到黑色96孔板里或100微升比色皿里
即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（单一测定或双重测定）：
单一测定：激发波长360nm，散发波长518nm，获得相对荧光单位（RFU）：RFU值高表明溶酶体酸性环境正常
双重测定：激发波长360nm，散发波长451nm，获得蓝色色荧光单位；激发波长360nm，散发波长518nm，获得绿色荧光单位――蓝色荧光单位除以绿色荧光单位最终获得荧光比值：比值高表明溶酶体酸性环境受到破坏
注意事项
本产品为20次操作
操作时，须戴手套
染色完成后，即刻进行荧光检测分析
孵育时，避免光照
建议待测样本溶酶体蛋白总量至少为5微克
正常溶酶体pH参考图像如下（40X）：上图为碱性蓝色荧光；下图为酸性绿色荧光
本公司提供系列溶酶体分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10534.2 纯化溶酶体内PH水平荧光检测试剂盒 20次
G&VS10534.2A 保存液（Reagent A） 毫升
G&VS10534.2B 染色液（Reagent B） 微升
G&VS10534.2C 稀释液（Reagent C） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10118.1 | 细胞/组织溶酶体（lysosome）粗提分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10118.2 | 细胞/组织活性溶酶体（lysosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10118.3 | 细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10440 | 溶酶体（lysosome）溶解试剂盒 | 20次 |
| G&VS10534.1 | 细胞溶酶体内PH水平荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10534.2 | 纯化溶酶体内PH水平荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10121.1 | 细胞溶酶体（lysosome）形态/活性荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10121.2 | 冰冻切片溶酶体（lysosome）形态/活性荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10577.1 | 细胞溶酶体（lysosome）形态绿色荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10577.2 | 冰冻切片溶酶体（lysosome）形态绿色荧光染色试剂盒 | 20次 |
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