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发布时间：2026/9/4 11:09:51 阅读次数：4
40S核糖体（ribosome）解离试剂盒产品说明书
主要用途
40S核糖体（ribosome）解离试剂是一种旨在通过物理和化学破膜以及等密度超速离心处理方法，分离出完整而纯化的40S核糖体组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种新鲜或冻存的动物和人体细胞或组织40S核糖体成分的分离。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶和蛋白酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景
核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞质（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，分子量为4.2MDs，由40S小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，分子量为2.7MDs，由30S小亚体和50S大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
解离液（Reagent C） 微升
分离液A（Reagent D1） 毫升
分离液B（Reagent D2） 毫升
保存液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存裂解液（Reagent B）和解离液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
超速离心管：用于样品操作的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
涡旋震荡仪：用于混匀
96孔板：用于样品收集的容器
酶标仪：用于核糖体检测
PARAFFIN封口膜：用于密封离心管
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。
一、 细胞40S核糖体分离
1）核糖体解离
1． 准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 107），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放入台式离心机离心10分钟，速度为500g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放入台式离心机离心10分钟，速度为500g
13． 小心抽去上清液
14． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀
16． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
17． 置于冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约80下）
18． 将所有细胞匀浆物移入1.5毫升离心管
19． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
20． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
21． 加入预冷的xx微升解离液（Reagent C），混匀
22． 置于冰槽里孵育10分钟
23． 放进37℃恒温水槽，孵育10分钟
24． 置于冰槽里备用
2）分离液配制
1． 移取xx毫升分离液A（Reagent D1）到10毫升超速离心管
2． 移取xx毫升分离液B（Reagent D2），枪头插入到10毫升超速离心管的底部
3． 缓慢加入，避免气泡（见下图）
4． 使用PARAFFIN封口膜密封管口
5． 小心缓慢放平离心管
6． 室温下，静置60分钟
7． 小心缓慢竖起离心管
8． 放进4℃冰箱里备用（注意：不宜超过24小时）
9． 操作示意图如下
3）核糖体分离
1． 小心从4℃冰箱里取出离心管
2． 小心沿着管壁，在分离液（Reagent D）上面，一滴一滴加入350至500微升上述获得的样品悬液（注意：避免晃动，同时离心前，使用矿物油填满离心管）
3． 小心放进4℃超速离心机离心16小时，速度为46000g（注意：使用悬吊式转子；0制动）
4． 小心取出离心管
5． 固定在支架上
6． 使用1毫升枪头，从顶端至离心管中间二分之一处，依次移取250微升（参见下面示意图）
7． 转移到96孔板的相应孔里（注意：做好标记）
8． 即刻放进酶标仪测读（波长为254nm）。获得吸光读数
9． 构建曲线图：纵坐标为OD254，横坐标为96孔板标号（见下面示意图）
10． 合并所有40S核糖体的溶液
11． 转移到6毫升超速离心管
12． 加满保存液（Reagent E）
13． 放进4℃超速离心机离心18小时，速度为250000g
14． 小心取出离心管
15． 小心抽去上清液
16． 加入xx微升保存液（Reagent E），混匀颗粒群
17． 转移到新的1.5毫升离心管
18． （选择步骤）进行核糖体定量测定 （A260），调节50至80 OD/毫升
19． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作
二、 组织细胞40S核糖体分离
1）核糖体解离
1． 准备好新鲜或冻存的动物组织，并秤重以确定1至2克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入一个液氮冻存管
5． 即刻放进液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个预冷的1.5毫升离心管
8． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
9． 涡旋震荡5秒，充分混匀
10． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
11． 置于冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）
12． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
13． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
14． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
15． 加入预冷的xx微升解离液（Reagent C），混匀
16． 置于冰槽里孵育10分钟
17． 放进37℃恒温水槽，孵育10分钟
18． 置于冰槽里备用
2）分离液配制
1． 移取xx毫升分离液A（Reagent D1）到10毫升超速离心管
2． 移取xx毫升分离液B（Reagent D2），枪头插入到10毫升超速离心管的底部
3． 缓慢加入，避免气泡（见下图）
4． 使用PARAFFIN封口膜密封管口
5． 小心缓慢放平离心管
6． 室温下，静置60分钟
7． 小心缓慢竖起离心管
8． 放进4℃冰箱里备用（注意：不宜超过24小时）
9． 操作示意图如下
3）核糖体分离
1． 小心从4℃冰箱里取出离心管
2． 小心沿着管壁，在分离液（Reagent D）上面，一滴一滴加入350至500微升上述获得的样品悬液（注意：避免晃动，同时离心前，使用矿物油填满离心管）
3． 小心放进4℃超速离心机离心16小时，速度为46000g（注意：使用悬吊式转子；0制动）
4． 小心取出离心管
5． 固定在支架上
6． 使用1毫升枪头，从顶端至离心管中间二分之一处，依次移取250微升（参见下面示意图）
7． 转移到96孔板的相应孔里（注意：做好标记）
8． 即刻放进酶标仪测读（波长为254nm）。获得吸光读数
9． 构建曲线图：纵坐标为OD254，横坐标为96孔板标号（见下面示意图）
10． 合并所有40S核糖体的溶液
11． 转移到6毫升超速离心管
12． 加满保存液（Reagent E）
13． 放进4℃超速离心机离心18小时，速度为250000g
14． 小心取出离心管
15． 小心抽去上清液
16． 加入xx微升保存液（Reagent E），混匀颗粒群
17． 转移到新的1.5毫升离心管
18． （选择步骤）进行核糖体定量测定 （A260），调节50至80 OD/毫升
19． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作
注意事项
1． 本产品为10次操作（1克动物组织或5 X 107细胞/次）
2． 建议使用足够的组织或细胞量
3． 样品操作均须在4℃或以下状态下进行
4． 用户可以使用分离液仪器（gradient maker）配制
5． 操作时，须无菌操作，避免污染母液
6． 用户可以使用自动组分收集器收集离心后的样品
7． 核糖体定量计算公式（微克/微升）： A260 ¸ 11.1或（皮摩尔/毫升）：A260 X 19
8． 用户可以使用Biuret法或OD值进行定量
9． 1克湿重细胞或组织可获得游离40S核糖体100至200微克
10． 如果进行核糖体蛋白萃取，建议使用纯化核糖体蛋白质萃取试剂盒—G&VS16041
11． 本公司提供系列核糖体分析技术产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性
3． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS10528.2 40S核糖体（ribosome）解离试剂盒 10次
G&VS10528.2A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10528.2B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10528.2C 解离液（Reagent C） 毫升
G&VS10528.2D 分离液A（Reagent D1） 毫升
G&VS10528.2E 分离液B（Reagent D2） 毫升
G&VS10528.2F 保存液（Reagent E） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10409.1 | 动物细胞/组织胞质核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10409.2 | 动物细胞/组织线粒体核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10409.3 | 动物细胞/组织总核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10410 | 动物细胞/组织纯化核糖体（ribosome）蛋白质萃取试剂盒 | 20次 |
| G&VS10411 | 80S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10412 | 70S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10413 | 核糖体（ribosome）RNA解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS15053 | 细菌核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 20次 |
| G&VS16040.1 | 植物总核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS16040.2 | 植物叶绿体核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS16040.3 | 植物线粒体核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS16040.4 | 植物胞质核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS16041 | 纯化核糖体（ribosome）蛋白质萃取试剂盒 | 20次 |
| G&VS60095.1 | 真菌/酵母细胞总核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS60095.2 | 真菌/酵母细胞线粒体核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS60095.3 | 真菌/酵母细胞胞质核糖体（ribosome）分离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10528.1 | 60S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10528.2 | 40S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10529.1 | 50S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10529.2 | 30S核糖体（ribosome）解离试剂盒 | 10次 |
| G&VS10530 | 核糖体稳定性检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10531 | 核糖体RNA定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10532 | 核糖体蛋白质定量检测试剂盒 | 20次 |
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