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发布时间：2026/9/7 13:47:55 阅读次数：31
石蜡切片组织NRF2免疫组化染色试剂盒产品说明书
主要用途
石蜡切片组织NRF2免疫组化染色试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括石蜡分离、抗原修复等，以及免疫抗体显色技术，即通过抗NRF2单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，从存档中的石蜡包埋的组织切片中分析NRF2表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、大鼠、小鼠等石蜡包埋组织切片的NRF2测定。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。
技术背景
核因子红系-2相关因子（nuclear factor erythroid-2 related factor；NNF-E2L2或NRF2）为碱性亮氨酸拉链蛋白（basic leucine zipper；bZIP）转录因子，广泛表达，尤其在肾脏、肌肉、肺和肝组织高度表达。与半胱氨酸丰富的细胞骨架蛋白Keap1（Kelch like ECH associated protein）结合，而停留在胞浆中，被泛素化和蛋白酶体降解。一旦受到来自于药物、异源生物体、炎症、离子化辐射等产生的氧化型或亲电子性（electrophilic）刺激，出现构型改变或磷酸化，NRF2从复合物中释放转移进入胞核，和基因组上目标基因启动子上抗氧化反应元素（antioxidant response element；ARE）区域结合，由此激活或诱导抗氧化蛋白和阶层II蛋白的表达，例如解毒蛋白NADPH醌氧化还原酶（NADPH QUINONE oxidoreductase1；NQO1）、谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase；GST）、辅酶Q10（coenzyme Q10）、超氧阴离子歧化酶1（superoxide dismutase1；SOD1）、SOD3、血红素加氧酶1（heme oxygenase1；HO1）等，由此产生协同性抗氧化、抗炎症、解毒和辐射保护反应，清除自由基，防止机体的氧化损伤，构建机体内源性细胞内抗氧化防御系统，维持氧化还原内平衡。NRF2和Kaep1复合物发生异常，竟会导致头颈部肿瘤、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、神经退性病变、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性阻塞性肺病等疾病。肌动蛋白（actin）在所有真核细胞普遍表达，高度保留的蛋白，构成细胞骨架的主要元素之一。通过抗NRF-2蛋白单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示NRF2蛋白细胞为棕褐色。
产品内容
脱蜡液（Reagent A） 150毫升（自备）
补水液A（Reagent B） 毫升
补水液B（Reagent C） 毫升
补水液C（Reagent D） 毫升
补水液D（Reagent E） 毫升
清理液（Reagent F） 毫升
酶解液（Reagent G） 毫升
封阻液（Reagent H） 毫升
一抗液（Reagent I） 毫升
二抗液（Reagent J） 毫升
显色液A（Reagent K） 微升
显色液B（Reagent L） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存酶解液（Reagent G）、一抗液（Reagent I）、二抗液（Reagent J）和显色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；二抗液（Reagent J）和显色液A（Reagent K），避免光照；有效保证3月
用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
特别注意
1． 显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉
2． 显色液A（Reagent K）如果出现沉淀，须过滤后再用
3． 石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则组织易脱落
实验步骤
一、 脱蜡处理
1． 取出10片待测的石蜡包埋的6微米厚组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2． 按下表依次放进小染色缸里孵育
| 染色缸 | 孵育时间 |
| xx毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| xx毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| xx毫升脱蜡液（Reagent A） | 15分钟 |
| xx毫升补水液A（Reagent B） | 3分钟 |
| xx毫升补水液B（Reagent C） | 3分钟 |
| xx毫升补水液C（Reagent D） | 3分钟 |
| xx毫升补水液D（Reagent E） | 3分钟 |
3． 小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
4． 小心加上xx微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
5． 室温下孵育5分钟
6． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
二、 蛋白消解处理
1． 小心加上xx微升酶解液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育5分钟
3． 小心移去切片上的酶解液（Reagent G）
4． 室温下，将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升封阻液（Reagent H），铺满整个切片样品表面
7． 室温下孵育5分钟
8． 小心移去切片上的封阻液（Reagent H）
9． 室温下，将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分钟
10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
三、 免疫标记处理
1． 小心加上xx微升含有一抗液（Reagent I），铺满整个切片样品表面
2． 在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
3． 小心移去切片上的一抗液（Reagent I）
4． 室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
四、 样本染色处理
在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的显色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取xx微升显色液A（Reagent K）和xx毫升显色液B（Reagent L）到2毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：
1． 小心加上xx微升二抗液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）
2． 室温下孵育30分钟，避免光照
3． 小心移去切片上的二抗液（Reagent J）
4． 室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升含有显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）的显色工作液，铺满整个切片样品表面
7． 室温下孵育5至30分钟，或直至样本出现棕褐色
8． 小心移去切片上含有显色液A（Reagent K）和显色液B（Reagent L）的显色工作液
9． 室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中浸泡5秒
10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
11． （选择步骤）进行甲基绿复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒－G&VS40010）
12． 放上盖玻片或封片
13． 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色
注意事项
1． 本产品为10次操作
2． 操作时须戴手套，以防污染
3． 石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
4． 用户可以使用二甲苯替代脱蜡液（Reagent A）
5． 清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用
6． 所有操作在室温下进行
7． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
8． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
9． 细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间
10． 细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察
11． 参考图像：
12． 本公司提供系列NRF2检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定显色清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10610.3 石蜡切片组织NRF2免疫组化染色试剂盒 10/20次
G&VS10610.3A 脱蜡液（Reagent A） 毫升
G&VS10610.3B 补水液A（Reagent B） 毫升
G&VS10610.3C 补水液B（Reagent C） 毫升
G&VS10610.3D 补水液C（Reagent D） 毫升
G&VS10610.3E 补水液D（Reagent E） 毫升
G&VS10610.3F 清理液（Reagent F） 毫升
G&VS10610.3G 酶解液（Reagent G） 毫升
G&VS10610.3H 封阻液（Reagent H） 毫升
G&VS10610.3I 一抗液（Reagent I） 毫升
G&VS10610.3J 二抗液（Reagent J） 毫升
G&VS10610.3K 显色液A（Reagent K） 毫升
G&VS10610.3L 显色液B（Reagent L） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10610.1 | 细胞NRF2免疫组化染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10610.2 | 冰冻切片组织NRF2免疫组化染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10610.3 | 石蜡切片组织NRF2免疫组化染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10611.1 | 细胞NRF2免疫荧光染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10611.2 | 冰冻切片组织NRF2免疫荧光染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10611.3 | 石蜡切片组织NRF2免疫荧光染色试剂盒 | 10次 |
| G&VS10612.1 | 细胞NRF2活性荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10612,2 | 组织NRF2活性荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10613,1 | 细胞NRF2活性比色法检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10613,2 | 组织NRF2活性比色法检测试剂盒 | 20次 |
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