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超白金Tag DNA 聚合酶产品说明书

发布时间:2026/9/8 9:34:36      阅读次数:33

超白金Tag DNA 聚合酶产品说明书

 

要用途

超白 Tag DNA 聚合酶是一种旨在方便、快速地进行各种复杂基因组模板, 小片断 DNA,保真 度要求高,扩增有难度的 DNA 扩增的重要反应分子。广泛运用在 DNA 片段在 5kb 之内的 PCR/RT-PCR/ 微卫星 DNA 扩增、 DNA 测序等技术操作。产物留有 3′端 A 尾巴,可直接克隆。产品即到即用,无核酶 污染,性能稳定,灵敏度、特异性、稳定性优势明显,扩增产量高,效果堪称同类产品最佳。

术背景

超白金 Tag DNA 聚合酶是一种热稳定的由单条蛋白多肽组成(分子量约为 94 kDa)的 DNA  合酶。通过将 Thermus aquaticus DNA 聚合酶的基因克隆, 在大肠杆菌(E. coli) 中表达后, 分离纯化而得 到的。其具有 5′-3DNA 聚合酶活性和5′-3′核酸外切酶活性,但无3′-5′核酸外切酶的活性。 Tag DNA 聚合酶的单位定义为在74℃条件下, 30 分钟内能够吸收 10mM dNTPs,形成酸 性不溶性物质所需的酶量作为一个活性单位。单位活性测试条件是: 25mM TAPS  (pH9.3),50mM KCl  2mM MgCl2 1 mM DTT 0.5mg/ml 鲑鱼精 DNA 0.2mM dNTPs

超白金 Tag DNA 聚合酶的储存缓冲成分包括 50%甘油,20mM TrisHCl(pH8.0),0. 1mM EDTA 1 mM DTT ,稳定剂。

 

产品内容

超白金 Tag DNA 聚合酶(Reagent A)(5U/微升)

10 PCR 完全缓冲液(Reagent B)

10 PCR 无镁缓冲液(Reagent C)

25mM MgCl2   (Reagent D)

补充液(Reagent E)

品说明书

 

保存方式

 

 

经常使用,保存在-20℃冰箱里;长期储存,保存在-70℃冰箱里;避免反复冻融,有效保证 6 月

 

实验提示

下列的反应体系为推荐使用,用户可以按照自己的反应体系操作:

1  一次反应总量为 50 微升,依次加入下列建议使用的用量到 0.5 毫升 PCR 管里:

 

浓度

10  PCR 完全缓冲液(Reagent B)

微升

1 X

DMSO

微升

建议使

2.5mM dNTP  混合

微升

 0.2 mM

引物 A  (25 微摩尔或 350 纳克)

微升

尔或 x x 纳克/微升

 

引物 B  (25 微摩尔或 350 纳克)

x x 微升

xx x 微摩尔或 x7x 纳克/微升

DNA 模板(100  纳克)

x 微升

x  纳克/微升

超白金 Tag DNA 聚合酶(Reagent A)

xx 微升

1 单位

补充液(Reagent E)

到总量 x 微升

 

 

2   混匀,瞬时离心 5

3  建议使用的 PCR 反应程序为:

 

(℃)

循环

95

Tm 用户设定温度(5062)

70

30 

30 秒至 1 分钟

30 秒至 3 分钟

 

2535

70

5 分钟

1

4.  PCR 物置于-20℃保存,直到进行任何后续实验

5  进行琼脂糖凝胶电泳分析

 

注意事

1   本产品为 100 酶单位总量

2   建议整个操作在 4℃下进行

3   建议使用洁净的 PCR 管和带有滤芯的枪头,以免污染

4   操作时,须戴手套

5   操作时,避免污染母液

6  据用户实际情况,调整各反应物成分的用量和反应时间

7  本产品建议使用赠送的 10  PCR 完全缓冲液(Reagent B) 和 补充液(Reagent E)。该缓冲液大师级科学家精心研制、成功实验证明的。用户无需调整镁离子浓度。其含有Ammonium Sulfate, Tris, Magnesium Chloride, Beta-Mercaptoethanol

8  根据用户 PCR 仪的性能,决定是否加入矿物油(Mineral Oil)

9  配制完成后,即刻进行扩增反应,以确保反应物的活

10 Tm=4  (G+C) +2  (A+T),用户可以测试最佳 Tm 温度。扩增片段 3kb 以上可以增加时间到 2 分钟

11.对于基因组 DNA 的扩增,其循环长时间为 30 秒至 3 分钟,即小于 500bp30 秒;小于 2kb1  钟;大于 2kb,每增加 1kb,增加 1 分钟

12.避免反复冻融

13.本产品同时分别提供 10  PCR 无镁缓冲液(Reagent C),其中含有 100mM TrisHCl(pH 9.0) ,500 mM KCl, 1%Triton X100 25mM MgCl2   (Reagent D) 溶液,便于用户选择。 建议 25mM MgCl2  (Reagent D) 可以在 50 微升反应体系终加入 3 微升, 其终浓度为 1.5mM

14.本公司提供 PCR 一步法反应体系

 

质量标

1   本产品经鉴定性能稳定

2   本产品经鉴定无核酶污染

3  本产品经鉴定反应产量


使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定, 保证说明书所的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题, 请立即以书面形式(实验报 )与本司联系, 并将该产品退回, 经检验确系产品质量所致, 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

情提醒

IF IT DOESN’T WORK   RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

品编号

名称

规格

G&VS12008. 1

10  PCR 完全缓冲液

100

G&VS12008.2

一步法 PCR 反应液

100

G&VS12008.3

白金 TAG DNA 聚合酶

200 U

G&VS12008.4

三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液

2.5/10mM:毫升

G&VS12008.5

一步法平端 PCR 反应液

100

G&VS12113

一步法荧光定量 PCR 反应液

100

G&VS20024.2

甲基化特异性 PCR 扩增(MSP)试剂盒

60

 


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