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发布时间:2026/9/8 9:34:36 阅读次数:33
超白金Tag DNA 聚合酶产品说明书
主要用途
超白金 Tag DNA 聚合酶是一种旨在方便、快速地进行各种复杂基因组模板, 小片断 DNA,保真 度要求高,扩增有难度的 DNA 扩增的重要反应分子。广泛运用在 DNA 片段在 5kb 之内的 PCR/RT-PCR/ 微卫星 DNA 扩增、 DNA 测序等技术操作。产物留有 3′端 A 尾巴,可直接克隆。产品即到即用,无核酶 污染,性能稳定,灵敏度、特异性、稳定性优势明显,扩增产量高,效果堪称同类产品最佳。
技术背景
超白金 Tag DNA 聚合酶是一种热稳定的由单条蛋白多肽组成(分子量约为 94 kDa)的 DNA 聚 合酶。通过将 Thermus aquaticus DNA 聚合酶的基因克隆, 在大肠杆菌(E. coli) 中表达后, 分离纯化而得 到的。其具有 5′-3′DNA 聚合酶活性和5′-3′核酸外切酶活性,但无3′-5′核酸外切酶的活性。 超白金 Tag DNA 聚合酶的单位定义为在74℃条件下, 30 分钟内能够吸收 10mM dNTPs,形成酸 性不溶性物质所需的酶量作为一个活性单位。单位活性测试条件是: 25mM TAPS (pH9.3),50mM KCl , 2mM MgCl2 ,1 mM DTT ,0.5mg/ml 鲑鱼精 DNA ,0.2mM dNTPs。
超白金 Tag DNA 聚合酶的储存缓冲成分包括 50%甘油,20mM Tris-HCl(pH8.0),0. 1mM EDTA, 1 mM DTT ,稳定剂。
产品内容
超白金 Tag DNA 聚合酶(Reagent A)(5U/微升)
10 倍 PCR 完全缓冲液(Reagent B)
10 倍 PCR 无镁缓冲液(Reagent C)
25mM MgCl2 (Reagent D)
补充液(Reagent E)
产品说明书
保存方式
经常使用,保存在-20℃冰箱里;长期储存,保存在-70℃冰箱里;避免反复冻融,有效保证 6 月
实验提示
下列的反应体系为推荐使用,用户可以按照自己的反应体系操作:
1 . 一次反应总量为 50 微升,依次加入下列建议使用的用量到 0.5 毫升 PCR 管里:
| 成分 | 容量 | 终浓度 |
| 10 倍 PCR 完全缓冲液(Reagent B) | 微升 | 1 X |
| DMSO | 微升 | 建议使用 |
| 2.5mM dNTP 混合液 | 微升 | 各 0.2 mM |
| 引物 A (25 微摩尔或 350 纳克) | 微升 | 微摩尔或 x -x 纳克/微升 |
| 引物 B (25 微摩尔或 350 纳克) | x -x 微升 | xx -x 微摩尔或 x-7x 纳克/微升 |
| DNA 模板(100 纳克) | x 微升 | x 纳克/微升 |
| 超白金 Tag DNA 聚合酶(Reagent A) | xx 微升 | 1 单位 |
| 补充液(Reagent E) | 到总量 x 微升 |
|
2 . 混匀,瞬时离心 5 秒
3 . 建议使用的 PCR 反应程序为:
| 温度(℃) | 时间 | 循环 |
| 95 Tm 用户设定温度(50-62) 70 | 30 秒 30 秒至 1 分钟 30 秒至 3 分钟 |
25-35 |
| 70 | 5 分钟 | 1 |
4. PCR 产物置于-20℃保存,直到进行任何后续实验
5 . 进行琼脂糖凝胶电泳分析
注意事项
1 . 本产品为 100 酶单位总量
2 . 建议整个操作在 4℃下进行
3 . 建议使用洁净的 PCR 管和带有滤芯的枪头,以免污染
4 . 操作时,须戴手套
5 . 操作时,避免污染母液
6 . 根据用户实际情况,调整各反应物成分的用量和反应时间
7 . 本产品建议使用赠送的 10 倍 PCR 完全缓冲液(Reagent B) 和 补充液(Reagent E)。该缓冲液由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。用户无需调整镁离子浓度。其含有Ammonium Sulfate, Tris, Magnesium Chloride, Beta-Mercaptoethanol 等
8 . 根据用户 PCR 仪的性能,决定是否加入矿物油(Mineral Oil)
9 . 配制完成后,即刻进行扩增反应,以确保反应物的活性
10 .Tm=4 (G+C) +2 (A+T),用户可以测试最佳 Tm 温度。扩增片段 3kb 以上可以增加时间到 2 分钟
11.对于基因组 DNA 的扩增,其循环延长时间为 30 秒至 3 分钟,即小于 500bp-30 秒;小于 2kb-1 分 钟;大于 2kb,每增加 1kb,增加 1 分钟
12.避免反复冻融
13.本产品同时分别提供 10 倍 PCR 无镁缓冲液(Reagent C),其中含有 100mM Tris-HCl(pH 9.0) ,500 mM KCl, 1%Triton X-100 和 25mM MgCl2 (Reagent D) 溶液,便于用户选择。 建议 25mM MgCl2 (Reagent D) 可以在 50 微升反应体系终加入 3 微升, 其终浓度为 1.5mM
14.本公司提供 PCR 一步法反应体系
质量标准
1 . 本产品经鉴定性能稳定
2 . 本产品经鉴定无核酶污染
3 . 本产品经鉴定反应产量高
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定, 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题, 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系, 并将该产品退回, 经检验确系产品质量所致, 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS12008. 1 | 10 倍 PCR 完全缓冲液 | 100 次 |
| G&VS12008.2 | 一步法 PCR 反应液 | 100 次 |
| G&VS12008.3 | 超白金 TAG DNA 聚合酶 | 200 U |
| G&VS12008.4 | 三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液 | 2.5/10mM:毫升 |
| G&VS12008.5 | 一步法平端 PCR 反应液 | 100 次 |
| G&VS12113 | 一步法荧光定量 PCR 反应液 | 100 次 |
| G&VS20024.2 | 基因甲基化特异性 PCR 扩增(MSP)试剂盒 | 60 次 |
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