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发布时间:2026/9/17 14:26:59 阅读次数:12
裂解液 VIII:细菌活性化蛋白制备溶液产品说明书
主要用途
裂解液 VIII:细菌活性化蛋白制备溶液是一种旨在使用化学和物理方法相结合, 快速有效且充分 裂解细菌细胞膜(或壁),并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下, 通过高速离心, 分离并收集所有细胞内可溶性 非变性蛋白质的重要辅助试剂。适合于各种革兰氏阴性和阳性细菌以及细菌包含体中野生蛋白或重组蛋白 的纯化。可直接用于后续蛋白电泳(SDS-PAGE)、西方杂交(Western blotting)、亲和层析纯化(affinity chromotagraphy)、免疫沉淀(immunoprecipitation)、酶活性分析(enzymatic activity analysis)、蛋白质相互 作用分析(protein-protein interaction)、特异性表达识别(specific expression identification)和质谱分析等。 尤其适合于后续融合蛋白, 例如 FLAG 标记蛋白系统、6 X 组氨酸标记(His-tag) 蛋白系统和谷胱甘肽-S- 转移酶(GST) 融合蛋白系统等的纯化操作。产品即到即用, 性能稳定, 操作便捷, 萃取产量和纯度皆佳。
技术背景
通过多种特殊裂解系统和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化内源性蛋白 酶的破坏,充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。
产品内容
裂解液(Reagent A)
产品说明书
保存方式
保存在-20C冰箱里,避免反复冻融,有效保证 6 月
用户自备
15 毫升锥形离心管:用于细菌细胞操作的容器
1.5 毫升离心管:用于细菌蛋白保存的容器
分光光度仪:用于测定细菌浓度
台式离心机:用于细菌收集
微型台式离心机:用于细菌蛋白收集以及去除杂质
超声仪:用于裂解细菌细胞
实验步骤
实验开始前,将试剂从-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里冻融。然后进行下列操作。
1. 准备好 10 毫升新鲜细菌样品
2. 在分光光度仪上测OD600为 1 (1 OD=1 X 109细胞/毫升)
3. 转移到预冷的 15 毫升锥形离心管
4. 放进 4℃台式离心机离心 20 分钟,速度为 3500g
5. 小心抽去上清液
6. 加入 2 毫升用户自备的预冷的缓冲液,混匀
7. 放进 4℃台式离心机离心 20 分钟,速度为 3500g
8. 小心抽去上清液
9. 加入 xx 微升预冷的含有 裂解液(Reagent A)
10.涡旋震荡 15 秒
11.(选择步骤)即刻置于超声仪枪头下,样品在冰槽里
12.(选择步骤)超声处理 4 至6 下 10 秒猝击(20%功率)
13.置于冰槽里孵育 30 分钟,期间每隔 5 分钟涡旋震荡 5 秒
14.转移到 1.5 毫升离心管
15.放进 4℃微型台式离心机离心 20 分钟,速度为 16000g (或 13000RPM,例如 eppendorf 5415)
16.小心移出上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管
17.放进-70℃的冰箱里备用
18.或放进冰槽里,继续各种后续(西方杂交、免疫沉淀等)操作
注意事项
1. 本产品为 20 次(10 毫升菌液)操作
2. 操作时须戴手套
3. 所有操作均须在无菌和 4℃状态下进行
4. 本产品适合格兰氏阴性和阳性细菌,但不同菌种的蛋白萃取效率存在差异
5. 冰冻细菌可以使用,但建议使用新鲜细菌,培养到指数生长阶段为理想状态
6. 10 毫升(OD600=1)菌液湿重约 0.1 至 0.2 克
7. 裂解液(Reagent A) 避免反复冻融
8. 如果操作不同菌液容量,可相应调整试剂用量,即 5 毫升菌液, 100 微升裂解液; 100 毫升菌液, 2 毫升裂解液等
9. 如果使用 45%功率,可超声处理 2 下 10 秒猝击;用户可根据实际情况进行调整
10. 本产品适用于含不可溶性包涵体的细菌
11. 10 毫升(OD600=1)菌液可获得 1 毫克总蛋白
12. 本产品获得最大限度的可溶性蛋白,包括包涵体蛋白
13. 本产品不含有巯基乙醇、 EDTA 和 DTT 等影响 6 X 组氨酸标记(His-tag)蛋白纯化的成分
14. 制备产物如果放在-70℃冰箱里储存备用,严格避免反复冻融
15. 本公司提供系列细菌试剂产品
质量标准
1 . 本产品经鉴定性能稳定
2 . 本产品经鉴定无蛋白酶污染
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证
说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回, 经检验确系产品质量所致, 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
| 编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS12060 | 裂解液 VIII:细菌活性化蛋白制备溶液 | 20 次 |
| G&VS30022. 1 | 细菌可溶性总蛋白质制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS30022.2 | 细菌可溶性膜蛋白质制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS30005 | 蛋白质西方杂交印迹试剂盒 | 10 次 |
| G&VS30006 | 西方杂交印迹消除试剂盒 | 20 次 |
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS60003.1 | 细菌β-半乳糖苷酶活性原位染色试剂盒 | 40 次 |
| G&VS60003.2 | 细菌 β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS60003.3 | 细菌 β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS60026.1.1 | 革兰氏阳性细菌基因组 DNA 纯化试剂盒 | 20 次 |
| G&VS60026.1.2 | 链霉菌属基因组 DNA 纯化试剂盒 | 20 次 |
| G&VS60026.2 | 革兰氏阴性细菌基因组 DNA 纯化试剂盒 | 20 次 |
| G&VS60038 | 细菌尼罗红染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS60040 | 细菌活力蓝色荧光(DAPI) 检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS60041 | 活力-死亡细菌双重荧光检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS60045 | 细菌膜损伤检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS12001 | 细菌冻存培养基 | 100 毫升 |
| G&VS12002 | 特殊细菌营养基 | 100 毫升 |
| G&VS60016 | 细菌菌落直接 PCR 检测法 | 100 次 |
| G&VS12056 | 裂解液 VII:细菌裂解溶液 | 50 次 |
| G&VS12060 | 裂解液 VIII:细菌活性化蛋白制备溶液 | 20 次 |
| G&VS12032 | 细菌-蛋白酶抑制剂混合溶液 | 100 微升 |
| G&VS60046 | 细菌 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS30022. 1 | 细菌可溶性总蛋白制备试剂盒 | 20 次 |
| G&VS30022.2 | 可溶性细菌膜蛋白制备试剂盒 | 20 次 |
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