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超白金M-MLV 逆转录酶产品说明书

发布时间：2026/9/20 14:26:45 阅读次数：3

超白金M-MLV 逆转录酶产品说明书

主要用途

超白金 M-MLV 逆转录酶是一种旨在方便、快速地进行各种含有较多 RNA 二级结构的 RNA 模板、长片断 RNA、微量 RNA、反应温度较高的 cDNA 合成的重要催化反应分子。广泛运用在 RNA 片段长达 12kb 的 cDNA 第一链合成、逆转录 PCR(RT-PCR)、微型 RNA(miRNA) 扩增、RNA 测序等技术操作。产品即到即用，无核酶污染，性能稳定，高温度、灵敏度、特异性、稳定性优势明显，扩增产量高，效果堪称同类产品最佳。

技术背景

超白金 M-MLV 逆转录酶是一种 RNA 依赖性 DNA 聚合酶。通过将大肠杆菌(E. coli)里近似同源于莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus)的 pol 基因修饰后，分离纯化而得到的。其带有 RNase H 的点突变，没有 RNase 活性，增强热稳定性。超白金M-MLV逆转录酶的单位定义为在 37℃条件下，10 分钟内能够催化 1nM dTTP，模板为poly(A) oligo(dT) 25，形成酸性不溶性物质所需的酶量作为一个活性单位。单位活性测试条件是： 50mM Tris－HCl (pH8.3)，40mM KCl， 7mM MgCl2，10 mM DTT，0.1mg/ml BSA， 0.5mM [3H]dTTP， 0.025mM oligo(dT)，0.25mM poly(A)，0.01％Nonidet P－40。超白金 M-MLV 逆转录酶的储存缓冲成分包括 50％甘油， 20mM Tris－HCl (pH7.5)，0. 1mM EDTA， 1 mM DTT，200mM NaCl，0.01％Nonidet P－40。

产品内容

超白金 M-MLV 逆转录酶(Reagent A)(200U/微升)

5 X 完全缓冲液(Reagent B)

DEPC 水(Reagent C)

产品说明书

保存方式

经常使用，保存在－20℃冰箱里；长期储存，保存在－70℃冰箱里；避免反复冻融，有效保证 6 个月

实验提示

下列的反应体系为推荐使用，用户可以按照自己的反应体系操作：

1 ．一次反应总量为 20 微升，其中分为两步：

第一步：打开二级结构

依次加入下列建议使用的用量到 0.5 毫升 PCR 管里：

成分	容量	总量
Oligo(dT) 18 (500 纳克/微升)	微升	纳克
或 Hexamer(随机引物)(200 纳克/微升)	微升	纳克

或特定引物(100 纳克/微升)	微升	纳克
总 RNA ( 1 微克/微升)	微升	微克
或 mRNA (200 纳克/微升)	微升	纳克
DEPC 水(Reagent C)	到总量微升

2 ．混匀，瞬时离心 5 秒

3 ．放进 70℃干式恒温仪，孵育 3 分钟

4 ．即刻放进冰槽里

5 ．第二步：进行生成反应

继续依次加入下列建议使用的用量到上述 PCR 管里

成分	容量	总量
5 X 完全缓冲液(Reagent B)	微升	微升
10mM dNTPs	微升
RNasin (40 单位/微升)	微升	单位
超白金 M-MLV 逆转录酶(Reagent A) (200U/微升)	微升	单位
DEPC 水(Reagent C)	到总量微升

6 ．混匀，瞬时离心 5 秒

7 ． (使用 Oligo(dT) 18 或特定引物)放进 42℃干式恒温仪，孵育 60 分钟 (使用 Hexamer 随机引物)放进 37℃干式恒温仪，孵育 60 分钟

8 ．放进 70℃干式恒温仪，孵育 15 分钟

9 ．直接进行后续第二链合成

10．或加入微升 DEPC 水(Reagent C)，混匀

11．移取微升进行后续 PCR 扩增或直接

注意事项

1 ．本产品为 2500 酶单位总量

2 ．本产品为 RNase H 点突变的 M－MLV 逆转录酶，其性能排序为： RNase H 点突变的 M－MLV 逆转录酶＞RNase H 缺失的 M－MLV 逆转录酶＞RNase H 无变化的 M－MLV 逆转录酶＞AMV (Avian Myeloblastosis Virus)逆转录酶

3 ． RNase H 的存在导致降解 RNA、限制全长 cDNA 合成、降低合成产量、降低热稳定性、影响实时分析等。

4 ．建议整个操作在 4℃下进行

5 ．建议使用洁净的 PCR 管和带有滤芯的枪头，以免污染

6 ．注意亚精胺(Spermidine)具有抑制 M－MLV 逆转录酶的作用

7 ．根据用户实际情况，调整各反应物成分的用量

8 ．如果合成全长 cDNA 产物或 RNA 模板具有较多二级结构，建议使用Hexamer 随机引物

9 ．如果 RNA 模板含量低于 1 纳克，建议降低超白金 M-MLV 逆转录酶(Reagent A) 的用量至

50 单位

10 ．5 X 完全缓冲液(Reagent B) 含有 250mM Tris－HCl (pH8.3)，375mM KCl，15mM MgCl2，50 mM DTT 等

11．配制完成后，即刻进行合成反应，以确保反应物的活性

12．避免反复冻融

13．本公司提供 RT-PCR 一步法和两步法反应体系，Oligo(dT)，Hexamer 随机引物，RNasin，一步法 PCR 反应体系等

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定，无核酶污染。

2 ．本产品经鉴定反应产量高，质量优异。

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息编号 G&VS12073 G&VS12073A G&VS12073B G&VS12073C G&VS12008.1 G&VS12008.2 G&VS12008.3	名称超白金 M-MLV 逆转录酶超白金 M-MLV 逆转录酶(Reagent A)(200U/微升) 5 X 完全缓冲液(Reagent B) DEPC 水(Reagent C) 10×PCR 完全缓冲液一步法 PCR 反应液超白金 TAG DNA 聚合酶	规格 2500 U 50 微升 1 毫升 10 毫升 100/200/500/1000 次 100/200/500/1000 次 100/200/500/1000 U
G&VS12008.4	2.5mM 三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液	1 毫升/5 毫升
G&VS12008.4	10mM 三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液	1 毫升/5 毫升
G&VS12008.4	25mM 三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液	1 毫升/5 毫升
G&VS12046	DEPC 水	500 毫升
G&VS12047	DMDC 水	500 毫升
G&VS12072	GENMED－RNasin(核糖核酸酶抑制剂)	2500 U
G&VS12080	Oligo(dT) 18 (500 纳克/微升)	100 微升
G&VS12081	Hexamer(随机引物)(200 纳克/微升)	100 微升
G&VS20020.1	两步法逆转录 PCR 试剂盒	20/50 次
G&VS20020.2	一步法逆转录 PCR 试剂盒	20/50 次
G&VS20020.3	直接细胞克隆两步法逆转录 PCR 试剂盒	100 次