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发布时间：2026/9/28 11:35:31 阅读次数：57
精子染色体扩散试验（chromatin dispersion）DAPI蓝色荧光检测试剂盒
产品说明书
主要用途
精子染色体扩散试验（chromatin dispersion）DAPI蓝色荧光检测试剂是一种旨在采用凝胶包埋精子细胞，通过变性和裂解处理，荧光染色后，呈现光晕或扩散现象，来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜或冻存人体或动物精子细胞等样品的DNA损伤研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。
技术背景
在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。精子DNA损伤或染色质完整性是不育症的主要因素之一。其中包括精子DNA碎片化（fragmentation）和染色体非整倍体（aneuploidy）数目异常，导致解释不清型不育（unexplained）、特发性不育（idiopathic）、反复性宫内着床或体外授精失败（repeated intrauterine/IVF failure），以及习惯性流产。精子染色体扩散试验（sperm chromatin dispersion test；SCD），是检测精子染色质松弛（decondensation）程度的方法，确定精子核DNA应对酸性变性处理的敏感性，评估精子染色体扩散能力。其方法与荧光原位杂交技术检测DNA断点高度相关。基于凝胶内的精子细胞，通过盐酸的变性处理，产生有限的单链DNA片段，进而在裂解处理下，形成去蛋白精子细胞核（nucleoid），由此出现围绕中心（core）的周边光晕现象（peripheral halo），即DNA扩散，表明DNA碎片化缺失，相反，DNA损伤或碎片化，则无法产生特征性的光晕现象。 其技术方法的基本步骤是：第一，细胞固定包埋在凝胶里；第二，DNA变性处理；第三，染色体裂解处理；第四，染色和图像分析。由此观察染色体扩散或光晕现象，进行体外检测，成为精子DNA损伤研究的基本手段。
产品内容
胶体液（Reagent A） 毫升
基质液（Reagent B） 毫升
酸性液（Reagent C） 毫升
裂解液A（Reagent D） 毫升
裂解液B（Reagent E） 毫升
清理液（Reagent F） 毫升
脱水液A（Reagent G） 毫升
脱水液B（Reagent H） 毫升
脱水液C（Reagent I） 毫升
染色液（Reagent J） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent J）和裂解液A（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；胶体液（Reagent A）和基质液（Reagent B）室温下保存；其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；脱水液A/B/C（Reagent G/E/F）具有挥发性，注意密闭瓶盖；有效保证6月
用户自备
磨砂载玻片和盖玻片：用于包埋样品进行染色
恒温培养箱或恒温水槽：用于孵育反应
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器
荧光显微镜：用于观察荧光现象
实验步骤
一、 琼脂载玻片准备
1． 准备1张完全磨砂载玻片，磨砂面朝上
2． 将胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出；参见注意事项4）
3． 放进45℃恒温水槽孵育10分钟
4． 移出xx微升胶体液（Reagent A）到载玻片中间
5． 盖上洁净的盖玻片
6． 轻压盖玻片5分钟，确保胶体液铺展
7． 放进4℃冰箱里备用
二、 样品准备
实验开始前，将基质液（Reagent B）置于90至100℃水槽里孵育5分钟加热溶化，然后放进37℃恒温水槽孵育5分钟。然后进行下列操作。
1． 准备好新鲜精液样品 （5 X 107细胞）
2． 放进37℃恒温水槽孵育30分钟
3． 移取50微升到新的1.5毫升离心管
4． 加入xx微升在37℃恒温水槽里的基质液（Reagent B）
5． 用枪头上下抽吸混匀
6． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片
7． 即刻移取50微升细胞基质混合液到载玻片上
8． 用新的盖玻片盖上
9． 轻压盖玻片5分钟，确保细胞基质混合液铺展
10． 放进4℃冰箱里冷却5分钟，直至胶体凝结，避免光照
11． 用大拇指推动移走盖玻片
12． 将载玻片放进9cm培养皿
13． 加入xx毫升酸性液（Reagent C）
14． 放进22℃恒温箱里孵育7分钟
15． 倒去酸性液
16． 加入xx微升裂解液A（Reagent D），覆盖在样品上面
17． 室温下孵育10分钟
18． 倒去裂解液A
19． 加入xx毫升裂解液B（Reagent E）（注意：使用前37℃温育）
20． 室温下孵育10分钟
21． 倒去裂解液B
22． 加入xx毫升清理液（Reagent F）
23． 室温下孵育2分钟
24． 倒去清理液
25． 加入xx毫升脱水液A（Reagent G），覆盖在样品上面
26． 室温下孵育2分钟
27． 抽去脱水液A
28． 加入xx毫升脱水液B（Reagent H），覆盖在样品上面
29． 室温下孵育2分钟
30． 抽去脱水液B
31． 加入xx毫升脱水液C（Reagent I），覆盖在样品上面
32． 室温下孵育2分钟
33． 抽去脱水液C
34． 空气中晾干
三、 染色分析
1． 加上xx微升染色液（Reagent J）
2． 盖上新的盖玻片
3． 室温下孵育5分钟，避免光照
4． 即刻在荧光显微镜下观察并拍照记录：激发波长360nm；散发波长460nm
5． 分析参数：
1） 形态分析，即光晕（halo）大小，即根据荧光图像观察精子细胞中有无光晕，估计 DNA 的损伤情况。
| 光晕形态 | 评估标准 | DNA损伤程度 |
| 大（注意事项7参考图像1） | 光晕宽度大于或等于核中心（core）直径 | 无损伤 |
| 中（注意事项7参考图像2） | 光晕宽度基于大光晕和小光晕之间 | 无损伤 |
| 小（注意事项7参考图像3） | 光晕宽度等于或小于1/3的核中心直径 | 损伤阳性 |
| 无（注意事项7参考图像4） | 光晕不存在 | 重度损伤 |
| 核降解 | 核中心不规则或微弱荧光 | 重度损伤 |
2） 损伤评估，即光晕百分比
计数300至500个精子细胞光晕形态所占的比例，估计 DNA 的损伤程度。通常大于30%视为异常指标
| SDF | DNA损伤程度 |
| < 15% | 低 |
| 15－30% | 中度 |
| > 30% | 高度 |
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 胶体液（Reagent A）和基质液（Reagent B）微波炉加热融化时，松开瓶盖，低功率，且密切观察，防止过度加热，导致溢出或干枯
4． 酸性液（Reagent C）、裂解液B（Reagent E）和清理液（Reagent F）可以重复使用
5． 如果裂解液A（Reagent D）和裂解液B（Reagent E）出现结晶析出，37℃温育后使用
6． 酸性液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；脱水液A/B/C（Reagent G/E/F）具有挥发性，注意密闭瓶盖
7． 操作时小心轻柔，避免胶体脱位
8． 精子DNA损伤光晕图像如下（1000倍）
9． 本公司提供系列DNA损伤检测分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定重复性好
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS14018.5 精子染色体扩散试验DAPI蓝色荧光检测试剂盒 50次
G&VS14018.5A 胶体液（Reagent A） 毫升
G&VS14018.5B 基质液（Reagent B） 毫升
G&VS14018.5C 酸性液（Reagent C） 毫升
G&VS14018.5D 裂解液A（Reagent D） 毫升
G&VS14018.5E 裂解液B（Reagent E） 毫升
G&VS14018.5F 清理液（Reagent F） 毫升
G&VS14018.5G 脱水液A（Reagent G） 毫升
G&VS14018.5H 脱水液B（Reagent H） 毫升
G&VS14018.5I 脱水液C（Reagent I） 毫升
G&VS14018.5J 染色液（Reagent J） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS14018.1 | 精子DNA吖啶橙（acridine orange）荧光检测试剂盒 | 50次 |
| G&VS14018.2 | 精子核成熟度（nuclear maturity）DNA色霉素A3（chromomycin A3）荧光检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS14018.3 | 精子核成熟度（nuclear maturity）DNA酸性苯胺蓝（aniline blue）染色检测试剂盒 | 50次 |
| G&VS14018.4 | 精子核成熟度（nuclear maturity）DNA甲苯胺蓝（toluidine blue）染色检测试剂盒 | 50次 |
| G&VS14018.5 | 精子染色体扩散试验（chromatin dispersion）DAPI蓝色荧光检测试剂盒 | 50次 |
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