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纯化增强型绿色荧光蛋白基因重组表达载体(pcDNA3-EGFP)产品说明书

发布时间:2026/10/15 17:16:49      阅读次数:16

 

纯化增强型绿色荧光蛋白基因重组表达载体(pcDNA3-EGFP)产品说明书

 

 

主要用途

纯化增强型绿色荧光蛋白基因重组表达载体(pcDNA3-EGFP)是一种克隆外源性水母(Aequorea victoria)中绿色荧光蛋白基因片段目标,突变处理后装载于真核生物表达载体pcDNA3.1+上的特定基因表达载体。适用于哺乳动物的转基因表达研究。产品即到即用,性能稳定,高拷贝量,表达保证。

 

技术背景

pcDNA3-EGFP是一种增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein;EGFP)基因重组表达载体。通过克隆水母(Aequorea victoria)中绿色荧光蛋白基因片段(700碱基),预先进行双点突变处理,即苯丙氨酸64(Phe64)为亮氨酸(Leu)和丝氨酸65(Ser65)为苏氨酸(Thr),以强化表达和发光,插入到真核生物表达载体pcDNA3.1+的XhoI和XbaI多克隆位点上,用于哺乳动物细胞或体内表达的报告基因,并可进一步进行基因重组后功能研究的工具。pcDNA3-EGFP是一个6.16kb的载体,在哺乳动物细胞稳态或暂态高度表达(拷贝数为500),发出强力的绿色荧光,并具有氨苄青霉素和新霉素抗性。其载体基本构架如下:

 

产品内容

载体液(Reagent A)          (500纳克/微升) 微升

载体菌液(Reagent B)          毫升(另购)

产品说明书                 1份

 

保存方式

保存在-70℃冰箱里,有效保证6月

 

用户自备

内切酶:用于载体酶切

克隆试剂盒:用于基因亚克隆

DNA纯化试剂盒:用于连接反应后载体纯化

感受态细菌:用于载体扩增的宿主细胞

 

实验提示

1. 可以直接转染到293细胞、Hela细胞、CHO细胞等各种细胞株,24小时后观察,可见许多亮绿色荧光

2. 使用2微克载体进行细胞转染;建议使用小量LipofusinX脂质体细胞转染试剂盒-G&VS10026

3. 使用25微克载体进行静脉体内转染;建议使用 SiRNA大量SperfusinX脂质体静脉法动物转染试剂盒-G&VS10055

4. 可以用于pCDNA3.1(+)系列的阴性对照

5. 可以用于构建其它目的基因-EGFP重组表达载体:位于EGFP上游或下游

6. 载体带有新霉素抗性(NeoR),真核细胞筛选可以使用G418(100至800微克/毫升终浓度)

7. 用户可以选择不同的酶切位点,进行基因片段连接反应

8. 可以使用常用感受态细菌,例如DH5α、DH10B、TOP10、JM101、XL1-Blue等进行克隆载体扩增

9. 载体带有氨苄青霉素抗性(AmpR),细菌筛选可以使用氨苄青霉素(50至100微克/毫升终浓度)

 

注意事项

1. 本产品为10微升(5微克)规格

2. 操作时,须戴手套

3. 可以使用常规克隆连接反应进行亚克隆

4. 测序引物:T7-正向 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'

5. 通用引物: CMV-正向:5’-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3’

BGH-反向:5’-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3’

6. 本公司提供系列重组基因载体产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定克隆保证

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

订购信息

编号           名称                             规格

G&VS17024      纯化增强型绿色荧光蛋白基因重组表达载体(pcDNA3-EGFP)           微升

G&VS17024A     载体液(Reagent A)                       微升

G&VS17024B      载体菌液(Reagent B)                       毫升

产品编号

载体名称

说明

规格

G&VS17024

pcDNA3.1+目的基因

真核表达

10微克+菌液

G&VS17025

pBADCE4.1+目的基因

双基因真核表达

10微克+菌液

G&VS17026

PGL3 BASIC+目的基因

报告基因

10微克+菌液

G&VS17027

pSilencer-NEO+SiRNA

SiRNA表达

10微克+菌液

G&VS17028

pBaBe-PURO+MiRNA

MiRNA表达

10微克+菌液

G&VS17029

pADEASY- pSHUTTLE+目的基因

腺病毒

10微克+菌液

G&VS17030

pSHUTTLE+目的基因

腺病毒穿梭载体

10微克+菌液

G&VS17031

pLKO.1-TRC+siRNA

慢病毒(siRNA)

10微克+菌液

G&VS17032

pGEX+目的基因

细菌表达

10微克+菌液

G&VS17033

pPICZ+目的基因

毕赤酵母表达

10微克+菌液

G&VS17034

pYES+目的基因

酿酒酵母表达

10微克+菌液

G&VS17035

pGBKT7+目的基因

酵母双杂交诱饵

10微克+菌液

G&VS17036

pGADT7+目的基因

酵母双杂交猎物

10微克+菌液

G&VS17037

pFASTBAC+目的基因

SF9昆虫表达

10微克+菌液

G&VS17038

pCAMBIA+目的基因

植物表达

10微克+菌液

G&VS17039

pZERO+目的基因

克隆基因

10微克+菌液

 


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