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发布时间：2026/10/15 17:19:41 阅读次数：15
真菌/酵母3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测
试剂盒产品说明书
主要用途
真菌/酵母3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的酶偶联反应系统中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法来测定真菌/酵母裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞裂解悬液样品3-磷酸甘油酸激酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；PGK；EC2.7.2.3）存在于大多数生命体的细胞里，为单体蛋白，高度进化保留，是卡尔文循环（calvin cycle）中产生ATP所必需的两个主要酶之一，也是糖酵解通路中的第七步反应，而归为转移酶，即通过转移来自于1,3二磷酸甘油酸中的酰基磷酸的磷酸基团到ADP上，产生ATP和3-磷酸甘油酸。在有氧呼吸，厌氧发酵、光合成固碳中所必需。人体3-磷酸甘油酸激酶分成2种亚型：PGK1和PGK2.。前者在所有细胞中表达，为X-染色体链接的变体；而后者只在精子生成细胞中表达，为常染色体链接的变体。一旦缺失，会导致溶血性贫血、智力障碍、癫痫、肌病等；过度表达，引起胃癌细胞侵袭。基于底物3-磷酸甘油酸在3-磷酸甘油酸激酶的作用下，转化为1,3二磷酸甘油酸产物后，通过甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）系统，测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm 波长），来定量分析3-磷酸甘油酸激酶的总活性。3-磷酸甘油酸激酶反应系统为：
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
强化液（Reagent B） 克
缓冲液（Reagent C） 毫升
底色液A（Reagent D） 毫升
底色液B（Reagent E） 毫升
反应液（Reagent F） 毫升
阴性液（Reagent G） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存裂解液（Reagent A）、缓冲液（Reagent C）、底色液A（Reagent D）、底色液B（Reagent E）和反应液（Reagent F）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；底色液B（Reagent E）和反应液（Reagent F）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
比色皿或96孔板：用于光度分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于光度分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的裂解液（Reagent A）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升）
2． 移入到预冷的15毫升锥形离心管
3． 置于冰槽里5分钟
4． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
7． 转移到预冷的1.5毫升离心管
8． 加入xx毫克强化液（Reagent B）
9． 强力涡旋震荡15秒
10． 置于冰槽里1分钟
11． 重复实验步骤9至10五次
12． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
13． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；底色液B（Reagent E）避免光照
3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升底色液A（Reagent D）
3． 加入xx微升底色液B（Reagent E）
4． 加入xx微升反应液（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育3分钟
7． 加入xx微升阴性液（Reagent G）
8． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
9． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（0分钟读数－5分钟读数）
四、 样品测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升底色液A（Reagent D）
3． 加入xx微升底色液B（Reagent E）
4． 加入xx微升反应液（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在25℃温度下孵育3分钟
7． 加入20微升待测样品（20微克蛋白）（注意：样品须清澈）
8． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
9． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（0分钟读数－5分钟读数）
五、计算样品活性
六、 酶标仪测定
1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到96孔板中的所有孔里
3． 分别加入xx微升底色液A（Reagent D）
4． 分别加入xx微升底色液B（Reagent E）
5． 分别加入25微升反应液（Reagent F）
6． 轻轻摇动96孔板
7． 在25℃温度下孵育3分钟
8． 分别加入xx微升阴性液（Reagent G）或待测样品（20微克蛋白）到相应孔里（注意：样品须清澈）
9． 轻轻摇动96孔板
10． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和5分钟读数
11． 活性计算
注意事项
1． 本产品为20次（比色皿）和80次（96孔板）操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
4． 系统操作过程中，背景测定只需1次
5． 建议使用比色皿测定
6． 样品须澄清，至关重要
7． 加样后3秒内光度测定
8． 测定值由高到低变化；测定可持续5分钟
9． 光度测定后，比色皿须清洗彻底
10． 样本测定0分钟读数高于5分钟读数表明具有酶活性
11． 建议标准待测样本蛋白浓度为20微克/20微升；如果样本酶活性过低或过高， 则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
12． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13． 3-磷酸甘油酸激酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.4条件下，每分钟内能够转化1微摩尔3-磷酸甘油酸和ATP至1,3二磷酸甘油酸所需的酶量作为一个活性单位
14． 本公司提供系列经典细胞激酶检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS16065.2 真菌/酵母3-磷酸甘油酸激酶活性光度法定量检测试剂盒 20次
G&VS16065.2A 裂解液（Reagent A） 毫升
G&VS16065.2B 强化液（Reagent B） 克
G&VS16065.2C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS16065.2D 底色液A（Reagent D） 毫升
G&VS16065.2E 底色液B（Reagent E） 毫升
G&VS16065.2F 反应液（Reagent F） 毫升
G&VS16065.2G 阴性液（Reagent G） 毫升
G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 200次
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS16065.1 | 植物3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS16065.2 | 真菌/酵母3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS50970.1 | 细胞3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS50970.2 | 组织3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS50970.3 | 细菌3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglyceratekinase；）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
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